[发明专利]鱿鱼墨多糖的提取方法

权利要求书

1.鱿鱼墨多糖的提取方法，包括鱿鱼墨粗多糖提取液制备、初步纯化、固相萃取柱层析、离子交换柱层析，其特征在于：所述初步纯化步骤为：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶酶解，灭酶，离心，将上清液中加入正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌后离心，浓缩，再加入无水乙醇醇沉，静置过夜，进行沉淀多糖，离心，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖。

2.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述初步纯化步骤中酶解的pH为6.5-7.5、温度为55-65℃、时间为8-15min，灭酶温度为90-100℃、时间为10-20min。

3.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述初步纯化步骤中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液的添加量为上清液体积的0.2-0.3倍。

4.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述初步纯化步骤中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的体积比为1:0.2-0.3:0.02-0.03。

5.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述鱿鱼墨粗多糖提取液制备步骤为：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:1.5-2.5向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在35-45℃下热水浸提3-5h，然后在0-5℃下继续浸提10-15h，离心，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液。

6.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述固相萃取柱层析步骤为：按料液比为1:4-6（g/mL）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在70-90℃下加热溶解20-30min，离心，沉淀物重复上述操作2-3次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，用超纯水洗柱2-4个柱体积，浓缩收集液，备用。

7.根据权利要求5所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述固相萃取柱层析步骤中固相萃取柱中的填料为微波改性活性炭。

8.根据权利要求6所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述微波改性活性炭的制备方法为：将活性炭置于浓度为3-6%的盐酸溶液中煮沸，并保持40-50min，滤去水分后用去离子水反复冲洗至中性，接着在100-120℃下烘干20-30h，然后将活性炭在微波功率为600-700W的条件下微波辐射4-6min，即得改性活性炭。

9.根据权利要求7所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述盐酸溶液中含有0.021-0.025%的马兜铃酸。

10.根据权利要求1所述的鱿鱼墨多糖的提取方法，其特征在于：所述离子交换柱层析步骤为：将浓缩收集液上DEAE-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-2mol/L的NaCl溶液分段梯度洗脱，控制流速为1-2mL/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经6000-10000Da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。