[发明专利]分离的抗体或其抗原结合片段及其在肿瘤治疗中的应用

说明书

本发明提出了一种分离的抗体或其抗原结合片段。该分离的抗体或其抗原结合片段可用于制备治疗肿瘤的药物。

技术领域

本发明涉及一种抗体，尤其涉及分离的抗体或其抗原结合片段及其在肿瘤治疗中的应用。

背景技术

人OX40是一个277aa的蛋白，但由于其在N146和N160位的糖基化，其表观分子量约为50kD[1,2]。OX40是一个I型穿膜蛋白，其胞外区段可与其天然配体OX40L(CD252)结合，胞内区段则与T细胞活化的多个信号通路相偶联。

人OX40主要表达于活化的T细胞上，包括CD4、CD8、Th和Treg细胞等(reviewed in[3])。在T细胞上OX40的表达很低，但是经过抗原诱导刺激后其表达水平上调并在12h至5-6天内达到峰值。类似的，OX40L的表达也受到细胞活化状态的影响[3]。APC细胞在抗原刺激后1-3天可以检测到OX40L的表达。有趣的是，除了免疫细胞外，肌肉细胞在炎症因子的刺激下也会表达OX40L[4,5]，提示OX40L-OX40信号通路可能广泛作用于机体的炎症反应。

基于OX40/OX40L主要表达于抗原激活的T细胞的特点，开发OX40激动剂有望成为一种特异性强、副作用低的免疫疗法。

抗原依赖的OX40L/OX40共刺激分子的活化与T细胞内多个信号通路相偶联。晶体结构研究表明，OX40L与OX40的结合可诱导OX40-OX40L复合物三聚体化[6]，从而在胞内形成与receptor-associated factor(TRAF)的结合位点。后者(TRAF2、5)则可进而激活NF-κB信号通路，抑制T细胞凋亡[5,7,8]。有研究发现，OX40活化可以导致Bcl-2和Bcl-xL高表达[9]，提示OX40可能通过NF-κB信号通路诱导抗凋亡蛋白表达而实现其抑制T细胞凋亡的功能。

PKB/PI3K是OX40下游的另一个重要信号通路。研究发现，一方面，T细胞上OX40的共刺激信号是维持PKB活化的必要条件，另一方面，组成型活化的PKB可以拮抗OX40缺陷导致的T细胞中抗凋亡蛋白的下调[10]。OX40共刺激信号可以通过PKB/PI3K信号通路维持Survivin的表达[11]。

最后，T细胞上TCR和OX40的活化还可以协同引起钙流和NFAT信号通路的活化，调节包括IL-2、IL-4、IL-5和IFN-γ在内的细胞因子的表达[12]。

综上，上述研究表明OX40的活化可以通过NF-κB信号通路、PKB/PI3K信号通路和NFAT信号通路来调节T细胞的增殖、凋亡和细胞因子分泌活性，从而达到增强免疫系统活力的效果。

但是对OX40的更深入的研究发现，CD4⁺细胞中Treg细胞亚群也会表达OX40。OX40在小鼠Treg细胞上持续表达，而人Treg细胞则是在活化后呈上调表达[13,14]。Treg是一类对效应T细胞(Teff)有抑制作用的细胞，因此研究OX40在Treg细胞上的功能是一个十分有趣的问题。现有的证据显示OX40信号通路对于nature Treg(nTreg)的发育影响不大，而大多数研究表明其对induced Treg(iTreg)的发育则有较明确的抑制性调节作用(reviewedin[3,15])。

与在Treg细胞发育中结论较明确不同的是，关于OX40信号通路对Treg细胞功能的调节作用的研究则不尽一致。一些研究表明OX40信号通路可以抑制Treg细胞的免疫抑制功能[14,16-20]；而另一些则发现OX40对于Treg细胞充分发挥其免疫抑制功能是必须的[21-23]。这种不一致可能与不同实验室采用的不同实验模型和实验条件相关，也提示OX40在机体内对Treg细胞的功能可能受到不同生理、病理条件的影响。