[发明专利]一种高活性胶原蛋白的提取方法及其应用

权利要求书

1.一种抗皱精华，其特征在于，含有鱼皮胶原蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种抗皱精华，其特征在于，按质量份计算，含有：

A组分8g，是鱼皮胶原蛋白冻干粉；

B组分：

3.一种高活性鱼皮胶原蛋白的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

第1步，组织破碎：将鱼皮解冻之后，加入水，物进行粉碎和研磨，在粉碎和研磨的同时外加超声作用，得到浆料；

第2步，去除盐溶性杂质：将浆料与氯化钠溶液混合，搅拌均匀后浸泡一段时间，离心去除上清，得到第一沉淀；

第3步，去除酸溶性杂质：将第一沉淀与柠檬酸溶液混合，第一沉淀与酸溶液重量比是1:5-9，浸泡一段时间后离心去除上清，得到第二沉淀；

第4步，酶解处理：第二沉淀与水混合再加入第二沉淀重量2-6％的木瓜蛋白酶进行酶解，第二沉淀与水的重量比是1:20-40，酶解温度为35-38℃，酶解过程中控制反应液pH在4.5-5.5，离心取上清，得到粗提物；

第5步，脱脂处理，粗提物用二氧化碳超临界脱脂；

第6步，精制处理：第5步的产物盐析，盐析后离心取沉淀，溶解，溶解液采用超滤脱盐和浓缩，超滤截留液冷冻干燥，即可得到白色无腥味的胶原蛋白冻干粉。

4.根据权利要求3所述的一种高活性鱼皮胶原蛋白的提取方法，其特征在于，第6步，超滤膜的截留分子量优选为大于2000kDa，小于3000kDa，包括截留分子量2200、2500或2600kDa。

5.根据权利要求3所述的一种高活性鱼皮胶原蛋白的提取方法，其特征在于，

第1步，组织破碎：将鱼皮解冻之后，加入水，使鱼皮与水的重量比在10:0.2-1，将混合物进行粉碎和研磨，在粉碎和研磨的同时外加超声作用，超声波强度控制在500-1000瓦/升，超声波的处理时间为30-60分钟，得到浆料；

第2步，去除盐溶性杂质：将浆料与氯化钠溶液混合，搅拌均匀后浸泡10-15h，离心，去除上清，得到第一沉淀；

第3步，去除酸溶性杂质：将第一沉淀与柠檬酸溶液混合，第一沉淀与酸溶液重量比是1:5-9，浸泡6-12h，离心，去除上清，得到第二沉淀；

第4步，酶解处理：第二沉淀与水混合再加入第二沉淀重量2-6％的木瓜蛋白酶进行酶解，第二沉淀与水的重量比是1:20-40，酶解温度为35-38℃，反应时间为6-12h，酶解过程中控制反应液pH在4.5-5.5，离心，取上清，得到粗提物；

第5步，脱脂处理，粗提物用二氧化碳超临界脱脂，粗提物加入到密封高压釜中，一边升温一边用高压泵充入CO₂，温度达到40℃，CO₂压力达到预定的要求，CO₂浓度为0.8g/mL(P＝20MPa)，处理时间10-20min；

第6步，精制处理：第5步的产物加入固体氯化钠，使氯化钠浓度为0.4-0.9mol/L，搅拌盐析，盐析后离心取沉淀，用0.4-0.8mol/L的醋酸溶解，溶解液采用超滤脱盐和浓缩，超滤截留液冷冻干燥，即可得到白色无腥味的胶原蛋白冻干粉。

6.根据权利要求3～5任一所述的一种高活性鱼皮胶原蛋白的提取方法，其特征在于，

第6步中采用的冷冻干燥是将超滤液于冻干机上进行冻存，冻存条件是:预冻阶段：设置温度从室温20℃降至设定值-50℃，持续保持维持该温度30-60min；升华阶段:真空干燥箱内压力控制在0.15-0.22mbar，采用两次升华方式：第一次升华温度从-40℃升至-15℃，此过程保持在90min左右；第二次升华温度从-15℃升至0℃，这个过程持续时间在120min；解吸阶段：真空箱内压力控制在0.16～0.22mbar，温度在40min内从O℃升温至30℃，随后在30℃维持200min。

7.一种护肤品，其特征在于，含有权利要求1或2所述的抗皱精华。

8.一种鱼皮胶原蛋白，其特征在于，根据权利要求3～6任一所述方法制备得到。

9.含有权利要求8所述鱼皮胶原蛋白的保健品或者细胞原代培养基或者护肤品或者医疗用品。

10.一种医用敷料，其特征在于，含有权利要求8所述鱼皮胶原蛋白，或者含有权利要求8所述鱼皮胶原蛋白及干细胞提取物。