[发明专利]一种检测滤纸干血片中肌酸激酶的试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种检测滤纸干血片中肌酸激酶的试剂盒，包括：酶试剂、铜试剂、

反应板、纸片标准品和纸片质控品。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶试剂包含试剂R1-1，R1-2，R2；其中，R1-1试剂包含80~110mmol/L的咪唑缓冲液，1~5mmol/L的NADP，5~10KU/L的己糖激酶，1~20mmol/L的醋酸镁，1~10mmol/L的AMP，0.01~1mmol/L的磷酸腺苷，0.5~5mmol/L EDTA，1~100mmol/L的葡萄糖；R1-2试剂包含1~10mmol/L EDTA，0.1~1mmol/L N-乙酰半胱氨酸，100~1000mmol/L的SH稳定剂；R2试剂包含1~100KU/L G6PDH，1~20mmol/L ADP，10~50mmol/L的磷酸肌酸，10~20mmol/L的防腐剂，100~200mmol/L的磷酸。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述铜试剂包含0.1~1g/L的CuSO4·5H2O，1~10g/L的Na2CO3，0.1~1‰g/L的酒石酸钾钠。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述反应板为未包被的空白微孔反应板。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述纸片标准品通过如下方法制备得到：以50%～55%的血细胞比容的人血红细胞和阴性血清混合物为基质，加入肌酸激酶纯品制备成4个以上不同浓度的标准品，以40~60µl体积分别滴加在滤纸上，干燥后得到。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述纸片质控品通过如下方法制备得到：以50%～55%的血细胞比容的人血红细胞和阴性血清混合物为基质，加入肌酸激酶纯品制备成两个不同浓度的质控品，以40~60µl体积分别滴加在滤纸上，干燥后得到。

7.一种检测滤纸干血片中肌酸激酶试剂盒的制备方法，包括：酶试剂的制备步骤；铜试剂的制备步骤；反应板的制备步骤；纸片标准品的制备步骤；纸片质控品的制备步骤；酶试剂、铜试剂、纸片标准品和纸片质控品分装的步骤；贴标签的步骤；成品组装的步骤。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述酶试剂的制备步骤的具体方法为：配制成R1-1试剂含80~110mmol/L的咪唑缓冲液，1~5mmol/L的NADP，5~10KU/L的己糖激酶，1~20mmol/L的醋酸镁，1~10mmol/L的AMP，0.01~1mmol/L的磷酸腺苷，0.5~5mmol/LEDTA，1~100mmol/L的葡萄糖；配制成R1-2试剂含1~10mmol/L EDTA，0.1~1mmol/L N-乙酰半胱氨酸，100~1000mmol/L的SH稳定剂；配制成R2试剂含1~100KU/L G6PDH，1~20mmol/L ADP，10~50mmol/L的磷酸肌酸，10~20mmol/L的防腐剂，100~200mmol/L的磷酸。

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述铜试剂的制备步骤为：配制成铜试剂含0.1~1g/L的CuSO4·5H2O，1~10g/L的Na2CO3，0.1~1‰g/L的酒石酸钾钠。

10.一种检测滤纸干血片中肌酸激酶的方法，其特征在于，使用权利要求1~6任一项所述的试剂盒，具体包括如下步骤：

（1）实验准备：将试剂所需数量的微孔反应板、纸片标准品、纸片质控品、样本及试剂平衡至室温；

（2）将纸片标准品、纸片质控品或样本用直径3.0mm的打孔器打入支架上；

（3）向每孔中分别加入100～200μl酶试剂工作液；

（4）反应板在37℃下，缓慢振荡孵育30～60min；

（5）向每孔中加入100～200μl铜试剂，于多功能荧光免疫分析仪内进行荧光计数；按测定参数进行拟合分析，得到定量结果。