[发明专利]一种即时检测淋球菌的荧光恒温检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种即时检测淋球菌的荧光恒温检测试剂盒，该试剂盒是一种在恒定温度下进行淋球菌基因扩增和检测的试剂盒。本发明基于恒温扩增反应试剂配合一种双色荧光标记的探针，可以进行即时荧光检测。本发明的恒温扩增体系，真正实现在同一个温度下进行基因扩增反应，反应体系不依赖于ATP、磷酸肌酸等高能能量分子，相对传统的恒温扩增体系，检测灵敏度提高，添加修饰聚合酶，使用更为方便。本发明的恒温扩增体系适用于复杂模板的扩增，扩增速度快且稳定，可以在15 min以内完成扩增反应，扩增的灵敏度和准确性高，不易出现错配，扩增效果好，真正实现即时检测。

技术领域

本发明涉及一种不依赖于高能量分子的恒温扩增技术，特别涉及一种即时检测淋球菌的荧光恒温检测试剂盒。

背景技术

淋球菌（n. gonorrhoeae）为严格的人体寄生菌，常存在于急性尿道炎与阴道炎的脓性分泌物的白细胞中，形态染色类似于脑膜炎球菌。

引发淋病的病原体是“淋病奈瑟氏菌”，即俗称的淋球菌。这种病菌拥有自我调节能力，能够通过变异获得抗药性，或者至少使药物的疗效下降，并且它正在对越来越多种类的抗生素发展出这种免疫力，先是青霉素对它失效，再是四环素，环丙沙星，而现在到了头孢克肟。

1879年，奈瑟从35例急性尿道炎、阴道炎及新生儿急性结膜炎病人的分泌物中，分离出淋病双球菌。1885年，Bumm在人、牛或羊的凝固血清培养基上培养淋球菌获得成功，将菌种接种于健康人的尿道内也可产生同样的症状。至此，淋球菌是淋病的病原体的结论始告成立。

淋球菌培养要求高，一般不易培养，需在培养基中加入腹水或血液。它是嗜二氧化碳的需氧菌，在PH6.5-7.5，温度35-37℃，含5%-10%二氧化碳环境中生长迅速。抵抗力弱，不耐干燥和寒冷，42℃存活20分钟，50℃仅存活5分钟，100℃立即全部死亡，对一般消毒剂敏感，对磺胺、青霉素较敏感，但易产生耐药性。国内采用巧克力琼脂或血琼脂培养基，均含有抗生素，可选择地抑制许多其他细菌生长。在36℃，70%湿度，含5%-10%CO2（烛缸）环境中培养，24-48小时观察结果。培养后还需进行菌落形态，革兰氏染色，氧化酶试验和糖发酵试验等鉴定。

人类是淋球菌唯一的自然宿主，淋病主要由性接触而传播。淋球菌侵入泌尿生殖系统繁殖，男性发生尿道炎，女性引起尿道炎和子宫颈炎。如治疗不彻底，可扩散至生殖系统。胎儿可经产道感染造成新生儿淋病性急性结膜炎。人类对淋球菌无自然免疫力，均易感，病后免疫力不强，不能防止再感染。

检测淋球菌对于妇产科疾病以及不孕不育的预防和诊断有着较为重大的意义。基于病原体DNA直接进行检测，相比培养法，悬滴法镜检等传统方法大大提高灵敏度，可以极大提升阳性检出率。

目前检测淋球菌的恒温扩增技术，虽检测快速但检测灵敏度不高，试剂使用时需要严格的低温配制环境，且易出现错配。

发明内容

针对现行技术检测灵敏度不高，试剂使用时需要严格的低温配制环境，且易出现错配等问题，本发明提供了一种灵敏度高，试剂使用时更方便，降低错配几率的检测淋球菌试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：一种即时检测淋球菌的荧光恒温检测试剂盒，包括反应液、启动液、反应酶系、特异性引物探针，所述反应液含有四甲基氯化铵，启动液含有乙酸镁，反应酶系含有修饰聚合酶。

进一步的，所述反应液包括：

Tris-HCl 20-70mM

KCl 30-90mM

四甲基氯化铵 100-300μM

二硫苏糖醇 1-4mM

甜菜碱 0.1-2M