[发明专利]单子叶植物不同存在形式氨基酸的分离提取方法

权利要求书

1.单子叶植物不同存在形式氨基酸的分离提取方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

步骤一、取单子叶植物的茎或叶片，切段，得茎段或叶段；

步骤二、将所述茎段或叶段用水浸没，并抽真空至所述茎段或叶段呈水渍状；该步骤中，用超纯水冲洗所述茎段或叶段的切口，收集成束，置于离心管内，在离心管的上部设置限位所述茎段或叶段、底部带有滤网的套筒，加入4℃超纯水直至高出叶段或茎段0.8-1.2cm，然后对所述离心管抽真空；抽真空的具体步骤为：抽真空7-10min，停止抽气，放气，如此循环2-3次；

步骤三、将呈水渍状的茎段或叶段晾至表面无水，离心，得细胞间隙液；将表面无水的茎段或叶段收集成束，置于所述套筒内，再将所述套筒装入离心管内，以1500-3500rpm的转速离心，得细胞间隙液；

步骤四、将所述细胞间隙液分为两份，分别检测所述细胞间隙液中可溶的游离氨基酸含量和可溶的蛋白水解氨基酸的含量；

步骤五、将步骤三中离心后的茎段或叶段剪碎、在冰浴中研磨成匀浆，离心，得细胞内液和固体残渣；

步骤六、将所述细胞内液分为两份，分别检测所述细胞内液中可溶的游离氨基酸含量和可溶的蛋白水解氨基酸的含量；并检测所述固体残渣中的不可溶蛋白水解氨基氨酸的含量。

2.如权利要求1所述的单子叶植物不同存在形式氨基酸的分离提取方法，其特征在于，步骤一中将所述单子叶植物的茎或叶片两端各切除0.3-0.8cm，之后将所述茎或叶片切成3-4cm的小段，得茎段或叶段。

3.如权利要求1所述的单子叶植物不同存在形式氨基酸的分离提取方法，其特征在于，步骤四或步骤六中，所述可溶的游离氨基酸含量的检测步骤为:

取细胞间隙液或细胞内液，加入等体积5％磺基水杨酸，以4500-5500rpm的转速离心5-10min，准确量取上清液加入正亮氨酸内标，50-60℃减压蒸发至近干，用pH2.1-pH2.3的盐酸溶液复溶，使用氨基酸检测仪检测，得对应样品中可溶的游离氨基酸含量。

4.如权利要求1或3所述的单子叶植物不同存在形式氨基酸的分离提取方法，其特征在于，步骤四或步骤六中，所述可溶的蛋白水解氨基酸含量的检测步骤为：

取细胞间隙液或细胞内液置于水解管内，加入等体积的浓盐酸，抽真空后封管，将水解管放置在110±1℃的恒温干燥箱中，水解20-24小时；冷却、开管、过滤，定容；准确量取定容后液体，加入正亮氨酸内标，50-60℃抽真空，蒸发近干，用1mL pH2.1-pH2.3的盐酸溶液复溶，使用氨基酸检测仪检测，将所得各氨基酸浓度减去对应样品相应的游离氨基酸含量，即可得对应样品可溶的蛋白水解氨基酸含量。

5.如权利要求1所述的单子叶植物不同存在形式氨基酸的分离提取方法，其特征在于，步骤五中，将剪碎的茎段或叶段置于冰浴的研钵中，加入2-3mL4℃超纯水，研磨成匀浆，转入离心管中，再用4℃超纯水清洗研钵，亦转入到离心管中，以4500-5500rpm的转速，离心5-10min，获得上清液为细胞内液。

6.如权利要求1或5所述的单子叶植物不同存在形式氨基酸的分离提取方法，其特征在于，将步骤五中所得固体残渣置于水解管中，加入6mol/L盐酸浸没所述固体残渣，抽真空后封管，并放置在110±1℃恒温干燥箱中，水解20-24小时；冷却、开管、过滤，定容；准确量取定容后液体，加入正亮氨酸内标，50-60℃抽真空，蒸发近干，用1mL pH2.2的盐酸溶液复溶，使用氨基酸检测仪检测，得细胞内不可溶的蛋白水解氨基酸的含量。