[发明专利]一种固相抗体双夹心免疫反应体系及其试剂盒与应用

说明书

本发明公开了一种固相抗体双夹心免疫反应体系及其试剂盒与应用，所述免疫反应体系采用全固相待反应组分，通过将检测抗体固相化，预置到反应孔或反应管中，待样本加入反应孔或反应管后，孵育后即可一步完成免疫反应，所述检测抗体固相化的方法为：将检测抗体预制微球或将检测抗体冻干；所述免疫反应体系的试剂盒应用与免疫检测方面，可以简化实验操作，同时提高免疫反应体系稳定性，降低基质效应，由此可以大大提高借助于免疫反应体系的实验效率，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于免疫反应检测技术领域，更具体地，涉及一种固相抗体双夹心免疫反应体系及其试剂盒与应用。

背景技术

1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附测定（enzyme linkedimmunosorbent assay, ELISA）后，该方法在科研和诊断领域得到了广泛的应用。根据检测对象和方法原理的不同，ELISA又可以分为直接发、间接法、双抗体夹心法、竞争法等多种形式。其中，双抗体夹心法由于适合测定目标抗原的浓度，在检测和诊断领域被应用的最为广泛。在此基础上，通过更换抗体标记物、标记酶或者反应底物，又衍生出了荧光法、化学发光法、上转发光、时间分辨等方法学，但本质上，还是通过双抗体夹心反应原理来检测抗原浓度。

现有的双抗体夹心免疫反应体系一般是将捕获抗体包被于固相载体上，待测抗原与之反应后，再加入检测抗体与被捕获的抗原反应。检测抗体一般需要以液体形式存在，可以提供浓缩液供在使用时临时稀释，或者直接提供稀释好的工作浓度检测抗体。然而，这两种方式都有其明显缺点：若以浓缩液提供，需要在用时临时稀释，操作繁琐，稀释后的抗体不能长期保存，容易浪费；若以稀释好的工作浓度提供，抗体在低浓度下容易不稳定。此外，无论采用上述何种形式，用户都需要进行两次加液或孵育，增加了操作复杂度。

因此，急需开发一种可以简化操作同时提高稳定性，降低基质效应的免疫反应体系，由此可以大大提高借助于免疫反应体系的实验效率。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有双抗体夹心免疫反应体系操作复杂，容易造成抗体浪费及抗体稀释后不够稳定的技术不足，提供一种操作简单，效果稳定，基质效应低的固相抗体双夹心免疫反应体系。

本发明要解决的另一技术问题是提供一种固相抗体双夹心免疫反应试剂盒。

本发明还一要解决的技术问题是提供所述固相抗体双夹心免疫反应试剂盒的制备方法。

本发明还一要解决的技术问题是提供所述固相抗体双夹心免疫反应试剂盒在免疫检测方面的应用。

本发明的目的通过以下技术方案予以实现：

提供一种固相抗体双夹心免疫反应体系，所述免疫反应体系采用全固相待反应组分，通过将检测抗体固相化，预置到反应孔或反应管中，待样本加入反应孔或反应管后，孵育后即可完成免疫反应；

所述检测抗体固相化的方法为：将检测抗体预制微球或将检测抗体冻干。

进一步地，所述将检测抗体预制微球或将检测抗体冻干的方法包括以下步骤：

S01. 将检测抗体与保护剂混合得混合物A；

S02. 将混合物A于-5～-196℃冷冻

S03. 将步骤S02中冷冻的混合物A保持温度在0℃以下，抽真空；

S04. 将步骤S03中抽真空后的混合物A干燥0.5～48小时，得固相检测抗体。

更进一步地，所述检测抗体固相化的方法还包括将检测抗体表面包裹薄膜。

进一步地，所述将检测抗体表面包裹薄膜的方法为：对冻干后的或微球化的抗体表面进行喷金处理。