[发明专利]药用牛血清白蛋白的分离纯化方法

说明书

本发明公开了一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，包括以下步骤：步骤一、取牛血液置于离心管，离心管可拆卸的设于密封容器内，向离心管内通入二氧化碳后密封，并将密封容器置于冷冻冰箱中，调节冷冻冰箱的温度由从20℃开始以5℃/min速度降至‑30℃并保持10min，然后以5℃/min的速度升温至20℃并保持4min，反复进行3次，取出，向离心管内加入牛血液总质量10％的浓度为3.8％的柠檬酸钠，再次通入二氧化碳后密封，离心管脱离密封容器，且通过离心机，控制温度低于2℃，分离去除血球，得血浆。本发明具有有效避免制备过程中多容器使用造成污染概率提升问题，同时提高血浆收率，药用牛血清白蛋白纯率的有益效果。

技术领域

本发明涉及蛋白提取技术领域。更具体地说，本发明涉及一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法。

背景技术

药用蛋白质牛血清白蛋白(Bovine serum albumin，BSA)又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基，分子量为66.446kDa，等电点为4.7，含氮量16％，含糖量0.08％，含脂量只有0.2％。牛血清白蛋白主要起维持渗透压作用、pH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加蛋白质可起到生理和机械保护作用和载体作用，同时，在深化研究、遗传工程和医药研究中有广泛的应用。

目前，牛血清白蛋白的生产方法有很多，主要包括盐析法、有机溶剂沉淀法、热激法等，其中盐析法主要为：以牛血为原料分离出血清，用硫酸铵分级沉淀后，经辛酸处理精制而得；有机溶剂沉淀法最早用于人血液制品的生产，利用乙醇的低价电常数性质以及蛋白质在一定温度、pH、离子强度及浓度条件下在不同浓度乙醇中的溶解度不同分离血浆蛋白质，可以生产出多种血清蛋白；热激法是取牛血抗凝剂离心后得到血浆，加热，加入辛酸钠，调pH值后加乙醇，再经过滤、脱盐、浓缩、冻干后得牛血清中白蛋白；其中，热激法是目前研究最为广泛的过程，但是在其制备过程中如何避免整个制备过程中多容器使用造成污染概率提升，并提高收率、纯率、以及牛血清白蛋白成品质量仍然是目前急需解决的问题。

发明内容

本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。

本发明还有一个目的是提供一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，有效避免制备过程中多容器使用造成污染概率提升问题，同时提高血浆收率，药用牛血清白蛋白纯率。

为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，包括以下步骤：

步骤一、取牛血液置于离心管内，离心管可拆卸的设于密封容器内，向离心管内通入二氧化碳后密封，并将密封容器置于冷冻冰箱中，调节冷冻冰箱的温度由从20℃开始以5℃/min速度降至-30℃并保持10min，然后以5℃/min的速度升温至20℃并保持4min，反复进行3次，取出，向离心管内加入牛血液总质量10％的浓度为3.8％的柠檬酸钠，再次通入二氧化碳后密封，离心管脱离密封容器，且通过离心机，控制温度低于2℃，分离去除血球，得血浆；

其中，所述离心管为倒置圆台状，所述密封容器包括：

密封塞，其可拆卸密封塞设于所述离心管顶部开口处，所述密封塞顶面向下凹陷形成容置槽，所述容置槽底面贯穿形成第一穿孔；

开合机构，其包括同轴固设于所述容置槽底面的第一导向管、所述第一导向管中下部填充的第一弹性塞、所述第一弹性塞顶面固接的第一弹簧、所述第一弹簧顶端螺接的第一压盖、同轴固设于所述第一压盖顶面的第二导向管、所述第二导向管中下部填充的第二弹性塞、所述第二弹性塞顶面固接的第二弹簧、所述第二弹簧顶端螺接的第二压盖，其中，所述第一压盖顶面贯穿设有第二穿孔，所述第二压盖顶面贯穿设有第三穿孔，所述第一弹性塞上位于第二穿孔正下方竖直贯穿第一弹性塞设有第一弹性孔，所述第二弹性塞上位于第三穿孔正下方竖直贯穿第二弹性塞设有第二弹性孔，其中，所述第一穿孔、第二穿孔、第三穿孔距离所述容置槽中轴线的距离相等；