[发明专利]药用牛血清白蛋白的分离纯化方法

权利要求书

1.一种药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、取牛血液置于离心管内，离心管可拆卸的设于密封容器内，向离心管内通入二氧化碳后密封，并将密封容器置于冷冻冰箱中，调节冷冻冰箱的温度由从20℃开始以5℃/min速度降至-30℃并保持10min，然后以5℃/min的速度升温至20℃并保持4min，反复进行3次，取出，向离心管内加入牛血液总质量10％的浓度为3.8％的柠檬酸钠，再次通入二氧化碳后密封，离心管脱离密封容器，且通过离心机，控制温度低于2℃，分离去除血球，得血浆；

其中，所述离心管为倒置圆台状，所述密封容器包括：

密封塞，其可拆卸密封塞设于所述离心管顶部开口处，所述密封塞顶面向下凹陷形成容置槽，所述容置槽底面贯穿形成第一穿孔；

开合机构，其包括同轴固设于所述容置槽底面的第一导向管、所述第一导向管中下部填充的第一弹性塞、所述第一弹性塞顶面固接的第一弹簧、所述第一弹簧顶端螺接的第一压盖、同轴固设于所述第一压盖顶面的第二导向管、所述第二导向管中下部填充的第二弹性塞、所述第二弹性塞顶面固接的第二弹簧、所述第二弹簧顶端螺接的第二压盖，其中，所述第一压盖顶面贯穿设有第二穿孔，所述第二压盖顶面贯穿设有第三穿孔，所述第一弹性塞上位于第二穿孔正下方竖直贯穿第一弹性塞设有第一弹性孔，所述第二弹性塞上位于第三穿孔正下方竖直贯穿第二弹性塞设有第二弹性孔，其中，所述第一穿孔、第二穿孔、第三穿孔距离所述容置槽中轴线的距离相等；

加热管，其可拆卸套设于所述离心管外侧，以与所述离心管外壁间形成包覆离心管外壁的储水腔，所述储水腔顶端塞设环形橡胶塞以密封储水腔，贯穿所述橡胶塞设置第四穿孔，所述第四穿孔上可拆卸连通导气管，所述导气管远离所述第四穿孔的一端为硬质管体，所述加热管外侧壁上部开设通孔；

加料机构，其包括塞设于所述通孔上的圆台状的移动塞、所述移动塞位于所述加热管外侧的小头铰接的活动杆、套设于所述活动杆外侧且开口固设于所述加热管位于所述通孔周向侧壁的加料袋，所述加料袋内放置质量比为1:3的柠檬酸和碳酸氢钠的混合物；

步骤一中向离心管内通入二氧化碳后密封具体为：依次盖设并旋转第二压盖、第一压盖，使得所述第一穿孔、第二穿孔、第三穿孔连通，所述导气管的一端依次穿过开合机构并与所述离心管连通，旋转活动杆，向所述储水腔内添加加料袋内混合物后密封通孔，向所述离心管内通入二氧化碳，抽出导气管端部，并旋转第二压盖、第一压盖，使得所述第一穿孔、第二穿孔、第三穿孔不连通，以密封离心管；

还包括：通气管，所述通气管一端与所述第一穿孔下端连通固接，所述通气管周向开设多个通气孔，多个通气孔的孔径沿靠近第一穿孔的方向逐渐变小；

所述密封塞顶面向下凹陷形成容纳槽，贯穿所述容纳槽底面形成第五穿孔，所述容纳槽内密封塞设容纳塞；

还包括：

步骤二、离心管置于密封容器内，所述储水腔内设有加热装置，控制储水腔内的水体温度为68-72℃，向所述离心管内加入血浆体积0.15-0.20％的辛酸钠，同时向所述离心管内通过所述通气管通入二氧化碳10-12min后，加入浓度为1mol/L的盐酸溶液，调节pH至5-5.5，继续通入二氧化碳5-6min后，加入血浆质量6％的浓度为80％的乙醇，持续通入二氧化碳10-12min后，离心，取上清液；

步骤三、将上清液置于超滤机内，使用分子量为18000的滤膜进行脱盐处理，后浓缩得浓缩液，浓缩液冻干，得药用牛血清白蛋白。

2.如权利要求1所述的药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，其特征在于，贯穿所述橡胶塞顶面形成第六穿孔，所述第五穿孔和第六穿孔通过管体连通，所述管体上设有流体沿第六穿孔流向第五穿孔的单向阀，所述管体上位于第六穿孔和单向阀间设有抽风机；

步骤二中通入二氧化碳的过程中，抽风机工作。

3.如权利要求1所述的药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，其特征在于，所述第一导向管和所述第二导向管的内部空腔均包括上下连通的圆柱状腔室、及倒置圆台状腔室，其中，所述第一弹性塞填充于所述第一导向管的倒置圆台状腔室内，所述第二弹性塞填充于所述第二导向管的倒置圆台状腔室内。

4.如权利要求1所述的药用牛血清白蛋白的分离纯化方法，其特征在于，步骤三中冻干具体为：将浓缩液从室温开始以20℃/min速度降至-40℃并保持8h，然后以20℃/min的速度升温至-25℃并保持15-16h，然后以5℃/min的速度升温至0℃并保持1-2h，最后以5℃/min的速度升温至20℃。