[发明专利]一种独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法

权利要求书

1.一种独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)对照品溶液的制备：

分别称取胡麻属苷、咖啡酸、绿原酸、山栀苷甲酯、马钱苷、8-O-乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷B、木犀草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成对照品溶液；

(2)供试品溶液的制备：

分别称取独一味药材、独一味制剂粉末(过四号筛)，置具塞三角锥形瓶中，加乙醇或10～50％甲醇或水，称重，回流提取45～75min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即分别得到独一味药材及其制剂供试品溶液；

(3)UPLC检测：

色谱条件为：色谱柱为C₁₈反相色谱柱(2.1×150mm,1.7μm)；柱温为30～40℃；检测波长为235nm；流动相A为乙腈，流动相B为0.1％～0.5％甲酸溶液，梯度洗脱，总流速为0.3～0.6ml/min，分析时间62分钟；所述梯度洗脱顺序表如下：

表1梯度洗脱顺序表

(4)以8-O-乙酰山栀苷甲酯为参照峰的标准指纹图谱的制定

吸取步骤(1)(2)所得的对照品溶液、独一味药材供试品溶液、独一味制剂供试品溶液各4μl，分别注入超高效液相色谱仪中，照高效液相色谱法测定，记录色谱图；依据所得的10批独一味药材、10批独一味制剂的指纹图谱，制定标准指纹图谱；所述独一味药材的标准指纹图谱具有23个特征峰，其中16号峰为8-O-乙酰山栀苷甲酯，所述独一味制剂的标准指纹图谱具有21个特征峰，其中15号峰为8-O-乙酰山栀苷甲酯；

(5)指纹图谱的质量控制

将独一味药材及其制剂指纹图谱与步骤(4)制定的标准指纹图谱进行比较，计算相似度，识别所具有的共有色谱峰的数量，确定相似度。

2.根据权利要求1所述的独一味药材及其制剂的UPHC指纹图谱检测方法，其特征在于其特征在于，所述步骤(1)对照品溶液的制备为：

分别称取胡麻属苷、咖啡酸、绿原酸、山栀苷甲酯、马钱苷、8-O-乙酰山栀苷甲酯、连翘酯苷B、木犀草苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷对照品各5mg，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，制成含对照品0.05mg/ml的对照品溶液；

所述步骤(2)供试品溶液的制备为：

分别称取独一味药材、独一味制剂粉末(过四号筛)0.8～1.2g，置具塞三角锥形瓶中，加乙醇或10～50％甲醇或水25ml，称重，回流提取60min，放冷，再称定重量，用同种溶剂补重，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即分别得到独一味药材及其制剂供试品溶液。

3.根据权利要求1或2所述的独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中流动相B为0.1％甲酸溶液。

4.根据权利要求1或2所述的独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中总流速为0.5ml/min。

5.根据权利要求1或2所述的独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中微孔滤膜的孔径为0.22μm。

6.根据权利要求1或2所述的独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：所述独一味药材指纹图谱是由23个共有指纹峰构成，以16号峰即8-O-乙酰山栀苷甲酯特征峰为参照峰，计算所得各共有峰的相对保留时间及相对峰面积见表1：

表1独一味药材指纹图谱23个共有指纹峰的相对保留时间及相对峰面积

7.根据权利要求1或2所述的独一味药材及其制剂的UPLC指纹图谱检测方法，其特征在于：所述独一味制剂指纹图谱是由21个共有指纹峰构成，以15号峰即8-O-乙酰山栀苷甲酯特征峰为参照峰，计算所得各共有峰的相对保留时间及相对峰面积见表2：

表2独一味制剂指纹图谱21个共有指纹峰的相对保留时间及相对峰面积