[发明专利]一种基于核酸适配体肺转移性骨肉瘤组织免疫荧光试剂盒

说明书

本发明提供一种基于核酸适配体肺转移性骨肉瘤组织免疫荧光试剂盒，该试剂盒包括a)抗原修复液，b)清洗液，c)核酸适配体稀释液，d）封闭液，采用标记Cy5的核酸适配体作为荧光探针，标记石蜡包埋的肺转移性骨肉瘤组织。本发明所提供的核酸适配体能够特异性结合肺转移性骨肉瘤细胞，而不结合其他细胞，其作为一种特异性识别肺转移性骨肉瘤的新型分子探针，对于易出现肺转移的骨肉瘤的早期诊断和治疗具有重要的研究意义。本发明所用的石蜡切片免疫荧光染色无需低温保存即能用于肺转移性骨肉瘤组织的病理的诊断检查，特异性强，敏感性高，操作简单，设备要求简单，定位性能好，于国内推广具有现实意义。

技术领域

本发明涉及组织免疫荧光技术领域，具体涉及一种基于核酸适配体肺转移性骨肉瘤组织免疫荧光试剂盒。

背景技术

骨肉瘤是一类发病率很高的非血液系统性的恶性结缔组织肿瘤，比较常见于儿童和青少年，尤其是青年男性，骨肉瘤一般是由分化程度比较低的成骨细胞所致，它具有非常高的肺转移特性，该瘤恶性程度甚高，预后极差，可于数月内出现肺部转移。

核酸适配体（aptamer）也称为核酸适体、适配子，是指通过指数富集的配基系统进化（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment，SELEX）技术从随机单链DNA/RNA文库中筛选得到的能够高亲合性和高特异性地与靶标分子结合的单链核酸。经过近三十年的发展，核酸适配体的研究取得了许多突破性的进展，核酸适配体具有与靶标分子结合特异性高、亲和力强，以及生物活性稳定、易于合成和保存等优点，成为生命分析化学研究的新方向。核酸适配体的研究从合成方法的改进到分子的修饰改性，再到各种物质的检测分析以及临床疾病诊断的应用，成为当前的热门研究项目。

组织免疫荧光技术是采用荧光物质标记的亲和素或已知抗体作为探针，与待测组织靶抗原结合，使形成的抗原抗体复合物上带有荧光物质，在激发光照射下，荧光物质发出明亮荧光，以此来检测抗原并通过荧光强度进行量化。由于组织免疫荧光技术特异性强，敏感性高，操作简单，设备要求简单，并且在组织中定位性能好，因此，常应用于临床病理诊断及科学研究。

目前关于将核酸适配体用于肺转移骨肉瘤细胞的诊疗的报道较少，并且治疗骨肉瘤面对着许多挑战，比如骨肉瘤细胞非常容易出现肺转移的情况，因此，急需一种有效的诊疗手段，而核酸适配体就可以为骨肉瘤的诊断提供有效的研究手段。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于核酸适配体肺转移性骨肉瘤组织免疫荧光试剂盒，该试剂盒采用修饰了Cy5的核酸适配体作为荧光探针，标记石蜡包埋的肺转移性骨肉瘤组织；更重要的是，采用该试剂盒能够经济、快速、灵敏、准确地对骨肉瘤组织进行检测。

为了实现上述目的，本发明采用以下技术措施：

一种基于核酸适配体肺转移性骨肉瘤组织免疫荧光试剂盒及应用，该试剂盒还包括a)抗原修复液，b)清洗液，c)核酸适配体稀释液，d）封闭液，采用修饰了Cy5的核酸适配体作为荧光探针，标记石蜡包埋的骨肉瘤组织；

所述的抗原修复液为0.005 -0.02M、pH 5.0-7.0柠檬酸钠缓冲液；

所述的清洗液为0.0057-0.0077 M、pH 7.2-7.6 PBS缓冲液；

所述的核酸适配体稀释液为200-300nM Cy5标记的核酸适配体；所述核酸适配体的序列为ATC CAG AGT GAC GCA GCA GGT TGA AAT GAT TAA TCC GCA ATA TTT TAT TGGACA CGG TGG CTT AGT；