[发明专利]降钙素原突变体及其制备方法和用途在审
| 申请号： | 201711453987.2 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN108084256A | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 陈庆全;王亚男;封冰;张贺秋;张明程 | 申请（专利权）人： | 北京市华信行生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/585 | 分类号： | C07K14/585;C12N15/16;C12N15/70;G01N33/74 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 101111 北京市大兴区经*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 降钙素原 突变体 连接臂 氨基酸序列 天然降钙素 原蛋白 水解 位点 制备 替换 氨基 氨基酸残基 柔性连接臂 体外稳定性 突变体片段 钙蛋白 降钙素 抗原性 多肽 保留 | ||
1.一种降钙素原突变体，其特征在于，该降钙素原突变体具有SEQ ID No:1所示的氨基酸序列，或者该降钙素原突变体具有将SEQ ID No:1所述的氨基酸序列经过一个或者几个氨基酸残基的取代、缺失或者添加后仍具有降钙素原突变体的稳定性的氨基酸序列；其中所述降钙素原突变体片段结构为降钙素原氨基多肽-连接臂1-降钙素-连接臂2-降钙蛋白，所述连接臂1为-Ala-Gly-，所述连接臂2为-Ala-Gly-Ala-Gly-。
2.根据权利要求1所述的降钙素原突变体，其特征在于，所述降钙素原突变体具有SEQID No:1所示的氨基酸序列。
3.一种编码降钙素原突变体的基因，其特征在于，所述基因具有SEQ ID No:2所示的核苷酸序列，或者所述基因具有编码SEQ ID No:1所示的氨基酸序列的核苷酸序列。
4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于，所述基因具有SEQ ID No:2所示的核苷酸序列。
5.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体含有如权利要求3所述的基因。
6.一种降钙素原突变体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.降钙素原突变体氨基酸序列的设计：采用连接臂1-Ala-Gly-和连接臂2-Ala-Gly-Ala-Gly-分别替换天然降钙素原蛋白位于58-59aa序列-Lys-Arg-和位于92-95aa序列-Gly-Lys-Lys-Arg-，获得序列SEQ ID No:1；
b.降钙素原突变体基因的优化和获得：采用大肠杆菌优势密码子对序列SEQ ID No:1进行人工优化，得到SEQ ID NO:2所示核苷酸序列，通过退火延伸PCR技术，获得由大肠杆菌优势密码子组成的降钙素原突变体基因；
c.降钙素原突变体表达载体的构建：将步骤(b)中获得到大肠杆菌的降钙素原突变体基因序列用NheI和XhoI进行双酶切，与同样经过NheI和XhoI双酶切的pET-30a(+)载体进行连接，得到表达载体；
d.降钙素原突变体的表达纯化：将步骤(c)中获得表达载体转化大肠杆菌BL-21感受态细胞，得到降钙素原突变体表达菌株，进行培养、诱导表达以及纯化，最终获得所述降钙素原突变体蛋白。
7.一种如权利要求1所述的降钙素原突变体在制备降钙素原抗原中的用途。
8.一种如权利要求1所述的降钙素原突变体在降钙素原检测试剂中标准曲线绘制中的用途。
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