[发明专利]一种紫苑石斛的组织培养育苗方法

权利要求书

1.一种紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，包括：

外植体选择步骤：在紫苑石斛母本植株的开花期进行人工授粉，长出果荚后，继续培育，采摘成熟果荚并置于冰箱中保存，得到备用果荚；

果荚消毒步骤：取所述备用果荚，将种壳表面清洗干净，得到第一洁净果荚；将所述第一洁净果荚移至接种室中，进行酒精消毒和无菌水冲洗，得到第二洁净果荚；将所述第二洁净果荚用次氯酸钠消毒和无菌水冲洗，得到第三洁净果荚；将所述第三洁净果荚用升汞消毒和无菌水冲洗，得到第四洁净果荚；

播种步骤：解剖所述第四洁净果荚，将果粉撒到1/2MS培养基上，转移至培养室中培养，得到萌芽种子；

继代培养步骤：将所述萌芽种子置于培养室中继续培养，直至种苗长到2-3cm，获取一级瓶苗；将所述一级瓶苗转移至1/2MS培养基中，生长至5-6cm时，获取二级瓶苗；

生根培养步骤：将所述二级瓶苗转移至生根培养基中进行培养，获取生根瓶苗；

炼苗驯化步骤：将所述生根瓶苗置于培养室中培养，然后移到室外环境中进行驯化，获取驯化苗；

移栽步骤：将所述生根培养基的瓶盖打开，继续放置所述驯化苗3-5天，然后倒出，并用多菌灵浸泡苗根部，接着洗净阴干，移栽至基质中进行驯化。

2.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述外植体选择步骤中，紫苑石斛母本植株的植株年龄为2-4年；长出果荚后继续培育3-4个月；将所述成熟果荚置于3-7℃的冰箱中保存1.5-2.5周。

3.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述果荚消毒步骤中，将所述备用果荚用洗洁精水或洗衣粉水浸泡15-20min，用毛刷刷干净种壳表面，并用自来水冲洗10-15min，得到第一洁净果荚；将所述第一洁净果荚放至洁净烧杯中，移至接种室，在无菌操作台上用75％医用酒精浸泡30-60s，浸泡期间用镊子不断搅拌，保证消毒彻底，接着用无菌水冲洗3-4次，得到第二洁净果荚；将所述第二洁净果荚用浓度为2％的次氯酸钠消毒外壳1-2min，接着用无菌水冲洗3-4次，得到第三洁净果荚；将所述第三洁净果荚用0.1％的升汞消毒6-8min，接着用无菌水冲洗4-5次，得到第四洁净果荚。

4.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述播种步骤中，用经过280-290℃高温消毒的解剖刀和镊子解剖所述第四洁净果荚，将果粉撒到1/2MS培养基后，并盖上经过消毒的培养基瓶盖；所述培养室的温度为24-26℃，光照强度为2000-2500Lx，光照时间为10-12小时/天，培养30-35天。

5.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述播种步骤中，在所述1/2MS培养基中添加2％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉，并将培养基的pH调至5.8-6.0。

6.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述继代培养步骤中，将所述萌芽种子置于光照强度为2000-2500Lx的培养室中继续培养，光照时间为10-12小时/天，生长50-60天，直至种苗长到2-3cm，获取一级瓶苗；在无菌环境下将所述一级瓶苗转移至1/2MS培养基中培养50-60天，生长至5-6cm时，获取二级瓶苗。

7.如权利要求1所述的紫苑石斛的组织培养育苗方法，其特征在于，在所述继代培养步骤中，在所述1/2MS培养基中添加0.8mg/L的萘乙酸、1.5mg/L的6苄基腺嘌呤6-BA、3％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁和0.3g/L的活性碳粉，并将培养基的pH调至5.8-6.0。