[发明专利]一种梳唇石斛组培扩繁育苗的方法

说明书

本发明公开了一种梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，包括外植体选择的步骤、外植体消毒的步骤、播种的步骤、继代培养的步骤、生根培养的步骤、炼苗、驯化移栽的步骤。该组培扩繁育苗方法能够有效的提高梳唇石斛种苗繁育的速度及数量，从母本源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现梳唇石斛优质种子种苗的工厂化生产，满足生产需求，缓解资源稀缺的现况。

技术领域

本发明涉及一种组织培养育苗技术，尤其涉及一种梳唇石斛组培扩繁育苗的方法。

背景技术

目前，梳唇石斛(Dendrobium strongylanthum Rchb.f.)为兰科植物，茎直立、肉质、圆柱形或者长纺锤形，具有多个节；总状花序通常有1-4个，顶生或侧生于茎的上部，花序轴纤细，密生20余朵小花，花黄绿色，萼片基部紫红色，唇瓣紫堇色，花期为9-10月。生长于海拔1000-2100米的山林树干上或者攀附在石头上，主要分布在中国的海南、云南南部到西部(景洪、普洱、双江、景东、绿春、腾冲、盈江)、缅甸、泰国等地。

目前国内市场上流通的梳唇石斛主要从云南普洱地区野生资源的收集，尚无人工栽培，一般通过分株繁殖和扦插的方式进行繁殖，繁殖种苗较少，繁殖率低，生长周期较长，正常生长环境下不经人工授粉结果的几率较小；由于果荚少，果粉细小，在自然环境下不易萌发生长等诸多因素的制约，野生资源无止境的采挖，导致梳唇石斛野生资源逐渐减少。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种梳唇石斛组培扩繁育苗的方法。该组培扩繁育苗方法能够有效的提高梳唇石斛种苗的繁育的速度及数量，从母本源头控制种质的稳定性，保证种苗质量，实现梳唇石斛优质种子种苗的工厂化生产，满足生产需求，缓解资源稀缺的现况。

本发明的目的采用如下技术方案实现：一种梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，包括：

外植体选择的步骤：选择健壮的梳唇石斛2-4年的母本植株；在每年9月下旬梳唇石斛开花期间对石斛进行人工授粉，让其长出果荚，经过3-4个月精心培育，待果荚成熟时，将成熟果荚采摘放至冰箱在3-7℃的环境下保存2周；

外植体消毒的步骤：取出成熟果荚，用洗洁精水或洗衣粉水浸泡15-20min，用毛刷刷净种壳表面，并用自来水冲洗10-15min；冲洗后将其放到洁净烧杯，移至接种室，在无菌环境下用医用酒精浸泡，浸泡期间用镊子不断搅拌使其消毒彻底，无菌水冲洗3-4次；再用次氯酸钠消毒外壳，无菌水冲洗3-4次；最后用升汞消毒，无菌水冲洗4-5次，放到超净工作台上的无菌盘里备用；

播种的步骤：将消毒好的果荚用剖刀和镊子解剖开露出粉黄色果粉，将果粉撒到1/2MS培养基上，消毒瓶盖后封好盖子，转到培养室中进行培养，培养30-35天种子开始萌发；

继代培养的步骤：萌发的梳唇石斛种子在光照强度为2000-2500lx，光照时间为10-12小时/天的条件下生长50-60天，梳唇石斛种苗长到2-3cm高，形成一级母瓶，此时将瓶苗在无菌环境下转到1/2MS培养基中培养60天，长至5-6cm时称为二级母瓶；

生根培养的步骤：将生长60天左右的二级母瓶在无菌环境下转至MS培养基中生根培养90天；

炼苗、驯化移栽的步骤：在生根瓶苗在培养室培养90天后，生根良好，苗粗壮，将其移到室外环境中放置15-30天，让其适应外界环境；打开瓶盖放置3-5天，将苗倒出，洗净培养基，用杀菌剂浸泡梳唇石斛苗根部15-20min，洗净阴干水分，将其移栽到基质中进行驯化。

进一步地，在外植体选择步骤中，选择3年生的梳唇石斛的母本植株最佳；所述果荚成熟时以外种壳黄绿色，完好无裂为准。

进一步地，在外植体消毒的步骤中，所述医用酒精的体积浓度为75％，浸泡时间为30-60s；所述次氯酸钠的体积浓度为2％，消毒时间为1-2min；所述升汞的质量浓度为0.1％，消毒时间为6-8min。