[发明专利]一种梳唇石斛组培扩繁育苗的方法

权利要求书

1.一种梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于包括，

外植体选择的步骤：选择健壮的梳唇石斛2-4年的母本植株；在每年9月下旬梳唇石斛开花期间对石斛进行人工授粉，让其长出果荚，经过3-4个月精心培育，待果荚成熟时，将成熟果荚采摘放至冰箱在3-7℃的环境下保存2周；

外植体消毒的步骤：取出成熟果荚，用洗洁精水或洗衣粉水浸泡15-20min，用毛刷刷净种壳表面，并用自来水冲洗10-15min；冲洗后将其放到洁净烧杯，移至接种室，在无菌环境下用医用酒精浸泡，浸泡期间用镊子不断搅拌使其消毒彻底，无菌水冲洗3-4次；再用次氯酸钠消毒外壳，无菌水冲洗3-4次；最后用升汞消毒，无菌水冲洗4-5次，放到超净工作台上的无菌盘里备用；

播种的步骤：将消毒好的果荚用剖刀和镊子解剖开露出粉黄色果粉，将果粉撒到1/2MS培养基上，消毒瓶盖后封好盖子，转到培养室中进行培养，培养30-35天种子开始萌发；

继代培养的步骤：萌发的梳唇石斛种子在光照强度为2000-2500lx，光照时间为10-12小时/天的条件下生长50-60天，梳唇石斛种苗长到2-3cm高，形成一级母瓶，此时将瓶苗在无菌环境下转到1/2MS培养基中培养60天，长至5-6cm时称为二级母瓶；

生根培养的步骤：将生长60天左右的二级母瓶在无菌环境下转至MS培养基中生根培养90天；

炼苗、驯化移栽的步骤：在生根瓶苗在培养室培养90天后，生根良好，苗粗壮，将其移到室外环境中放置15-30天，让其适应外界环境；打开瓶盖放置3-5天，将苗倒出，洗净培养基，用杀菌剂浸泡梳唇石斛苗根部15-20min，洗净阴干水分，将其移栽到基质中进行驯化。

2.如权利要求1所述的梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在外植体选择步骤中，选择3年生的梳唇石斛的母本植株最佳；所述果荚成熟时以外种壳黄绿色，完好无裂为准。

3.如权利要求1所述的梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在外植体消毒的步骤中，所述医用酒精的体积浓度为75％，浸泡时间为30-60s；所述次氯酸钠的体积浓度为2％，消毒时间为1-2min；所述升汞的质量浓度为0.1％，消毒时间为6-8min。

4.如权利要求1所述的梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在播种的步骤中，所述解剖刀和镊子需要经286℃高消毒并冷却。

5.如权利要求1所述的梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在播种的步骤中，所述1/2MS培养基中添加2％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉，培养基的pH调至5.8-6.0；所述培养室的培养条件如下：温度为24℃-26℃，光照强度为2000-2500lx，光照时间为10-12小时/天。

6.如权利要求1所述的梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在继代培养的步骤中，所述1/2MS培养基中添加0.5mg/L的萘乙酸、2.0mg/L的6苄基腺嘌呤6-BA、3％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、0.3g/L的活性碳粉，培养基的pH调至5.8-6.0。

7.如权利要求1所述的梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在生根培养的步骤中，所述MS培养基中添加1.5mg/L的萘乙酸、0.5mg/L的6苄基腺嘌呤6-BA、3％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、25g/L的香蕉汁、0.3g/L的活性碳粉，培养基的pH调至5.8-6.0。

8.如权利要求1所述的梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在炼苗、驯化移栽的步骤中，所述室外环境的温度为22-28℃、湿度为45％-75％，且需要避免强光直射。

9.如权利要求1所述的梳唇石斛组培扩繁育苗的方法，其特征在于，在炼苗、驯化移栽的步骤中，所述杀菌剂为多菌灵溶液；使用时将多菌灵稀释到800-1000倍。