[发明专利]一种红根野蚕豆茎段组织培养育苗方法

说明书

本发明公开了一种红根野蚕豆茎段组织培养育苗方法，包括外植体选择步骤：将红根野蚕豆种子播种后置于培养瓶中，继代培养直至种苗长到10‑12cm，获取一级瓶苗；接种步骤：取出一级瓶苗，经过消毒后，取出种苗，切除种苗茎杆上的叶子和叶柄，然后再将种苗茎杆切成若干个茎段，每个茎段至少带一个腋芽，然后将若干个茎段移栽到1/2MS培养基上进行培养，得到接种茎段；增殖培养步骤：将接种茎段转入培养室内进行培养，使得茎段的侧芽长到3‑5cm，获取二级瓶苗；生根培养步骤：将二级瓶苗转移至生根培养基中进行培养，获取生根瓶苗。本发明采用红根野蚕豆瓶苗茎秆切成小段增殖，快速的增加了红根野蚕豆育苗的数量，缓解资源稀缺的现况。

技术领域

本发明涉及组织培养技术领域，尤其涉及一种红根野蚕豆茎段组织培养育苗方法。

背景技术

红根野蚕豆，植物界中被子植物门、双子叶植物纲、玄参科、胡麻草属，为红根野蚕豆茎段的全草centranthera cochinchinensis(lour.)merr.[digitaliscochinchinensis lour.]，又名大花胡麻草、化血丹、小红药、滑野蚕豆等；性温、味酸、微辛，用于散瘀止血，消肿止痛；主治咯血、咳血、吐血、妇女闭经、内伤出血、中老年风湿痹痛、筋骨疼痛、脑淤血、脑血栓、酒精肝等。红根野蚕豆是一种名贵的地方民族中药，主要分布在越南、云南靠越南边境的红河州、文山州等地，目前红根野蚕豆野生资源较少，人们采挖过度，存在种子自然繁殖能力低，移栽不易成活等问题，导致红根野蚕豆野生资源稀缺。

红根野蚕豆全株具有药用价值，在《云南思茅中草药选》和《新华本草纲，云南红河中草药手册》均有记载；由于种子细小，通过传统的方式，种子繁殖能力低，繁殖速度慢，自然条件下种子直播出苗率在20％-30％左右，第一年才能长到2-3厘米高，生长周期为3-5年，生长周期较长，满足不了用药需求。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种红根野蚕豆茎段的组织培养育苗方法，该方法采用红根野蚕豆瓶苗茎秆切成小段增殖，快速的增加了红根野蚕豆育苗的数量，缓解资源稀缺的现况。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种红根野蚕豆茎段组织培养育苗方法，其特征在于，包括：

外植体选择步骤：将红根野蚕豆种子播种后置于培养瓶中，继代培养直至种苗长到10-12cm，获取一级瓶苗；

接种步骤：取出一级瓶苗，经过消毒后，取出种苗，切除种苗茎杆上的叶子和叶柄，然后再将种苗茎杆切成若干个茎段，每个茎段至少带一个腋芽，然后将若干个茎段移栽到1/2MS培养基上进行培养，得到接种茎段；

增殖培养步骤：将接种茎段转入培养室内进行培养，使得茎段的侧芽长到3-5cm，获取二级瓶苗；

生根培养步骤：将所述二级瓶苗转移至生根培养基中进行培养，获取生根瓶苗。

进一步地，外植体选择步骤中，继代培养的时间为70-80天。

进一步地，接种步骤中，消毒过程如下：将一级瓶苗移到接种室内，在无菌操作工作台上进行如下操作；首先撕去一级瓶苗的瓶口上的封口膜，用喷有浓度为75％的酒精的湿抹布擦净瓶体，放到无菌操作工作台上，将瓶盖置于酒精灯附近顺时针消毒2圈，打开瓶盖，瓶口在酒精灯上消毒2圈，用镊子将红根野蚕豆苗取出放到接种盘上。

进一步地，接种步骤中，茎段的长度为1.5-2.5cm。

进一步地，接种步骤中，在所述1/2MS培养基中添加0.2mg/L的萘乙酸、2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤(6-BA)、浓度为3％的蔗糖、4.5g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、0.2g/L的活性碳粉，并将培养基的pH调至5.8-6.0。