[发明专利]一种消化RPE细胞的方法在审
| 申请号： | 201711430944.2 | 申请日： | 2017-12-26 |
| 公开（公告）号： | CN109957545A | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 范国平;闫占海;方攀峰;李宁;谢磊 | 申请（专利权）人： | 江苏艾尔康生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/079 | 分类号： | C12N5/079;C12N9/50;C12N9/00 |
| 代理公司： | 北京安杰律师事务所 11627 | 代理人： | 袁沁菲 |
| 地址： | 214028 江苏省无锡市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 均匀覆盖 消化 细胞贴壁 | ||
1.一种消化酶组合物，包括重组酶TrypLE和中性蛋白酶Dispase II，其中，使用所述酶组合物可以解除RPE细胞的贴壁状态。
2.一种消化酶组合物在制备用于解除RPE细胞贴壁状态的试剂或试剂盒中的应用，其中，所述消化酶组合物包括重组酶TrypLE和中性蛋白酶Dispase II。
3.一种消化酶组合物在解除RPE细胞贴壁状态的用途，其中，所述消化酶组合物包括重组酶TrypLE和中性蛋白酶Dispase II。
4.如权利要求1至3中任一项所述的应用或如权利要求3所述的用途，其中，所述中性蛋白酶Dispase II的浓度选自0.5mg/mL至4.0mg/mL中的任一浓度，优选选自2.0mg/mL至4.0mg/mL中的任一浓度。
5.一种消化RPE细胞以解除其细胞贴壁状态的方法，包括以下步骤：
(1)使用1×重组酶TrypLE，使其均匀覆盖于RPE细胞；和
(2)使用中性蛋白酶Dispase II溶液，使其均匀覆盖于RPE细胞；
其中步骤(1)和(2)是分步实施。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述中性蛋白酶Dispase II的浓度选自0.5mg/mL至4.0mg/mL中的任一浓度，优选选自2.0mg/mL至4.0mg/mL中的任一浓度。
7.如权利要求5或6所述的方法，其中，所述RPE细胞为培养15天至17天中任一时间点的细胞。
8.如权利要求5或6所述的方法，其中，在所述步骤(1)中重组酶TrypLE处理RPE细胞的条件为37℃温育14至16分钟。
9.如权利要求5或6所述的方法，其中，在所述步骤(2)中，所述中性蛋白酶Dispase II处理RPE细胞的条件为37℃温育10至15分钟。
10.如权利要求5或6所述的方法，其中，所述RPE细胞为培养大于17天的任一时间点的细胞。
11.如权利要求11所述的方法，其中，在所述步骤(2)中，所述中性蛋白酶Dispase II处理RPE细胞的条件为37℃温育20至22分钟。
12.如权利要求6至11任一项所述的方法，其步骤还包括：
在所述步骤(1)或(2)之前用无钙镁离子的DPBS清洗细胞并弃掉清洗液。
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