[发明专利]一种发酵制备麸皮水溶性膳食纤维的方法

权利要求书

1.一种发酵制备水溶性膳食纤维的方法，其特征在于：所述方法采用米根霉作为单一菌种进行固态发酵；

具体步骤如下：

(a)菌种活化；

土豆斜面培养基PDA：向烧杯中加入100mL蒸馏水，加热至沸腾，依次加入马铃薯浸出粉0.6％，无水葡萄糖2.0％，琼脂1.5～2.0％，搅拌至全部溶解，趁热分装，每支试管加塞后包扎，在121℃高压条件下灭菌20min，冷却至50～60℃，摆斜面，制成斜面试管培养基；

其中，上述百分数为在100ml蒸馏水中的比例，按照100ml蒸馏水100g换算；

在超净工作台中，将保存于4℃的米根霉接种于上述斜面试管培养基上，25℃培养箱中培养3～4天，待其长出成熟孢子后，得已活化斜面，置于冰箱中4℃保存；

(b)种子培养；

液体培养基：在250mL锥形瓶中加入葡萄糖10g/L，蛋白胨1g/L，蒸馏水50mL，吐温–80100μL，微量元素50μL，营养盐溶液5mL，1mol/L柠檬酸缓冲液2.5mL，121℃条件下灭菌20min，得种子液体培养基，冷却备用；

其中，所述微量元素为ZnSO₄·7H₂O 1.4g/L、MgSO₄·H₂O 1.6g/L、Fe₂(SO4)₃·7H₂O5.0g/L；所述营养盐溶液为MgSO₄·7H₂O 3.0g/L、KH₂PO₄ 2.0 g/L、(NH₄)₂SO₄ 1.4 g/L、尿素3.0g/L；

种子液体培养：用无菌水冲洗已活化斜面，制备孢子悬液，稀释至孢子浓度为10⁶～10⁸个/mL后，加入玻璃珠分散均匀；在250mL锥形瓶中装入50mL种子液体培养基，将孢子接种于液体培养基内，接种量为10％，28～30℃温控摇床中培养72h，摇床转速140r/min，得种子培养液；

(c)固态发酵；

发酵培养基：取小麦麸皮20.0g，用蒸馏水将含水量调节至50％～60％，搅拌分散均匀，封口后121℃灭菌20min，冷却至室温待用；

固体发酵培养：向每个发酵用容器中加入接种量为8～10％的种子培养液，置于霉菌培养箱内，在28～30℃下培养4～5天；

(d)对步骤(c)中得到的麸皮进行淀粉酶、糖化酶处理；

按300U/g麸皮加入耐高温α–淀粉酶，95℃恒温搅拌30min；冷却物料至60℃，按230U/g麸皮加入糖化酶，60℃恒温搅拌30min；95℃加热15min灭酶处理，用碘液检测是否还有淀粉残留以达到完全去除淀粉目的；

(e)浸提；

浸提液为蒸馏水，固液比1:8，提取温度90℃，提取时间1h，重复提取三次，得粗多糖溶液；

(f)酶解；

取粗多糖溶液，添加13.12U/g麸皮的碱性蛋白酶，调节pH为7.0，55℃水浴加热，酶解时间1.2h，95℃高温加热15min灭酶处理，离心，取上清液，得酶解后的粗多糖溶液；

(g)TCA法脱蛋白；

取酶解后的粗多糖溶液继续脱蛋白，加入等体积的TCA溶液，使TCA最终浓度达到1.5％，混合均匀后静置30min，离心，取上清液；

(h)乙醇梯度沉淀；

精密称取250mg SDF，配制成50mL悬浮液，分批多次加入95％乙醇进行乙醇梯度沉淀，每次加入5mL，最终使乙醇体积浓度达到90％以上，边加边搅，每次所得醇沉液4℃下静置2h，5000r/min离心10min，收集沉淀，蒸馏水透析并冷冻干燥后得到各级多糖，称重并采用苯酚-硫酸法测定总糖含量，以总糖含量计算收率；

(i)将(h)步骤中沉淀产物离心、冻干即为麸皮水溶性膳食纤维。

2.根据权利要求1所述的发酵制备水溶性膳食纤维的方法，其特征在于：所述发酵条件为：取小麦麸皮，加入蒸馏水，调节含水量至总质量的50～60％，搅拌分散均匀，封口，121℃高压灭菌20min，冷却至室温后，按接种量8～10％接入均匀分散的种子菌球培养液，霉菌培养箱内28～32℃培养4～5天。