[发明专利]一种生姜脱毒组织培养方法

权利要求书

1.一种生姜脱毒组织培养方法，其特征在于：包括：

（1）选材：选取无腐无病害、健壮生姜块茎；

（2）催芽：将选取好的生姜块茎置于无光照室内，维持温度25~30℃，湿度40~50%，放置7~10d，此时生姜芽外植体1~2cm；

（3）茎尖脱毒：将步骤（2）中得到的生姜芽外植体采用流水冲洗干净，将其浸入吐温-80水溶液中10~20min，随后用流动水将吐温-80冲洗干净；将处理好的芽外植体采用75%酒精消毒1~5min，1%HgCl溶液消毒10~20min；剥离茎尖；将剥离好的茎尖接种至培养基Ⅰ上，放置于温度25~28℃、每天光照7~12h、光照强度为2500~3500Lux的培养环境中，培养40~60d；

（4） 增殖、继代：选取步骤（3）中得到的无菌苗将其接种到培养基Ⅱ上进行增殖培养，培养条件为：温度25~26℃、每天光照10~12h、光照强度为3000~5000Lux、培养20~30d；在培养基Ⅲ上重复上述增殖过程；

（5）生根：选取长势健壮的株高2~3cm的生姜苗，将其接种至培养基Ⅳ中，放置于温度25~26℃、每天光照10~12h、光照强度为5000~7000Lux的环境中，培养20d；

（6）驯化炼苗：将步骤（5）得到的根系发达，株高8~10cm的生姜苗转移到小温棚中进行驯化，遮荫，保持小温棚中温度为25~26℃，7天后逐渐递减至18~20℃，15天后将生姜苗从组织培养基中去除，将根部的培养基清洗干净，种植到基质土中；

其中：

培养基Ⅰ为B5培养基中添加0.5mg/LIBA、1.0mg/LKT、0.5mg/L活性炭、30%蔗糖和4.5g/L琼脂；

培养基Ⅱ为B5培养基中添加2.0mg/LKT、0.5mg/LNAA、30%蔗糖和4.5g/L琼脂；

培养基Ⅲ为B5培养基中添加0.1mg/LNAA、0.5mg/LKT、30%蔗糖和4.5g/L琼脂；

培养基Ⅳ为B5培养基中添加0.5mg/LIBA、20%蔗糖和4.5g/L琼脂。

2.根据权利要求1所述的一种生姜脱毒组织培养方法，其特征在于：所述一种生姜脱毒组织培养方法还包括抗生素处理，在步骤（3）茎尖脱毒用到的培养基Ⅰ中加入抗生素青霉素、卡那霉素、硫酸链霉素、利福平中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的一种生姜脱毒组织培养方法，其特征在于：所述抗生素的添加量为10mg/L~1g/L。

4.根据权利要求1所述的一种生姜脱毒组织培养方法，其特征在于：所述步骤（3）中吐温-80水溶液浓度为2~4%。

5.根据权利要求1所述的一种生姜脱毒组织培养方法，其特征在于：所述步骤（6）中，组织培养苗从培养瓶中取出后，前期维持小温棚内湿度为90%以上，逐渐递减，直至小温棚上薄膜完全揭掉。