[发明专利]双靶向配体化力达霉素DTLL的制备工艺改进和质量标准制定在审
| 申请号： | 201711407843.3 | 申请日： | 2017-12-22 |
| 公开（公告）号： | CN109957591A | 公开（公告）日： | 2019-07-02 |
| 发明（设计）人： | 邵荣光;李亮;叶程;曹睿;宋文凭;李良;李毅;刘秀均;甄永苏;赵春燕 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医药生物技术研究所 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所 11038 | 代理人： | 李英 |
| 地址： | 100050*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备工艺 质量标准制定 力达霉素 融合蛋白 双靶 免疫融合蛋白 工业化规模 可溶性蛋白 细菌内毒素 表达条件 参考标准 发酵菌体 破碎菌体 条件优化 中试发酵 转化宿主 后发酵 产率 冻干 菌株 去除 破碎 改进 诱导 筛选 高产 监测 优化 生产 | ||
1.SEQ ID NO.1所编码的融合蛋白DTLP的表达方法，其包括：
(1)当发酵罐或者培养瓶不大于3L时，采用含有将表达载体pET-DTLP的BL21starTM(DE3)为初始菌株，制备8-10ml种子液，接种至0.8L-1.5L的LB培养基中，培养基中含有卡那霉素50μg/ml，37℃摇床继续振荡培养至OD600＝0.5-0.6加入终浓度为0.1mM IPTG诱导6-8小时；或
(2)当发酵罐25L-35L时，采用含有将表达载体pET-DTLP的BL21starTM(DE3)为初始菌株，制备种子液，接种至12L-15L的LB培养基中，所述培养基含有卡那霉素50μg/ml，37℃发酵培养至OD600＝0.4-0.6加入终浓度为0.1mM IPTG诱导3.5-4.5小时。
2.双靶向配体化力达霉素DTLL的制备流程工艺改进方法，其包括权利要求1的(1)或者(2)，进一步包括采用压力破碎法破碎菌体提取总可溶蛋白。
3.权利要求2的工艺改进方法，其进一步包括发色团的制备和组装、内毒素去除和检测步骤。
4.权利要求2的工艺改进，其新增了检测蛋白粗提取物蛋白质含量、纯化后免疫融合蛋白DTLP蛋白质含量、DTLP蛋白质纯度；DTLL的最终产量、组装效率以及内毒素含量的步骤。
5.权利要求4的工艺改进方法，其进一步包括DTLL的稳定性检测。
6.权利要求5的工艺改进方法，其中双靶向配体化力达霉素DTLL的稳定性检测包括：影响因素考察、加速试验考察和长期实验考查；还包括DTLL的pH值、蛋白质纯度、力达霉素发色团含量测定、细胞亲和活性与细胞毒活性测定。
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