[发明专利]测定铝盐吸附型DTap-IPV联合疫苗中D-抗原含量的方法

说明书

本发明公开了一种用于解吸附铝盐吸附型DTap‑IPV联合疫苗中D‑抗原的解吸附剂，其为含有至少一种表面活性剂的柠檬酸盐溶液。基于该解吸附剂，本发明建立了一种测定铝盐吸附型DTap‑IPV联合疫苗中D‑抗原含量的方法。该方法涉及的样品处理过程减少了铝盐佐剂对吸附型DTap‑IPV联合疫苗中D‑抗原含量检测的干扰，具有重复性高、准确度高、特异性好的特点，为铝盐吸附型DTap‑IPV疫苗的质量控制提供参考。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体地说，涉及一种测定铝盐吸附型DTap-IPV联合疫苗中D-抗原含量的方法。

背景技术

脊髓灰质炎D-抗原是DTap-IPV疫苗(百白破-脊髓灰质炎联合疫苗)的主要有效成分，其有效成分含量与疫苗的保护效果有关，因此，D-抗原含量是DTap-IPV疫苗质量控制的重要一项。

目前，D-抗原含量的检测采用酶联免疫吸附法，其原理是将脊髓灰质炎多抗吸附在酶联反应板上，使供试品中的待检抗原与其发生特异结合，再加入酶标抗体，使其与吸附在酶标板上的抗原结合形成免疫复合物，通过酶反应底物在酶的作用下产生显色反应，并根据颜色变化对供试品种的抗原做定量分析。但是其检测结果易受佐剂等非抗原物质的干扰。而DTap-IPV疫苗为氢氧化铝吸附型疫苗。氢氧化铝佐剂与抗原表面携带的负电荷基团发生共价或配位结合，以颗粒的方式包裹抗原，与可溶性抗原一起形成沉淀，从而使复合物更具免疫性。氢氧化铝与抗原结合屏蔽了抗原表面的特异性结合位点，进而在抗原的体外检测过程中，抗原无法与酶联反应或酶标抗体上的特异抗体相结合，从而导致抗原检出量偏低。

因此，有必要针对脊髓灰质炎病毒抗原与氢氧化铝佐剂之间的吸附，开发一种解吸附液，从而使其可以破坏抗原与佐剂之间的作用力，在短时间内解离抗原，并通过酶联免疫法对解离后的脊髓灰质炎病毒抗原进行准确定量。

发明内容

本发明要解决的技术问题是准确检测出铝盐吸附型DTap-IPV联合疫苗中脊髓灰质炎的D-抗原含量，进行有效地质量控制。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种用于解吸附铝盐吸附型DTap-IPV联合疫苗中D-抗原的解吸附剂，其为含有至少一种表面活性剂的柠檬酸盐溶液。

所述柠檬酸盐溶液为5％-30％(优选20％)的柠檬酸钠溶液。

所述表面活性剂为非离子型表面活性剂，优选TritonX-100。

所述表面活性剂在柠檬酸盐溶液中的终浓度为0.05％-0.2％，优选0.1％。

此外，一些金属离子螯合剂、有机酸、乙二醇等物质可以针对抗原与佐剂之间存在的一种或几种相互作用力进行破坏，达到解离抗原的目的。上述物质可以替代表面活性剂用于解吸附剂制备中。

在本发明的一个具体实施方式中，所述解吸附剂为含有TritonX-100的20％柠檬酸钠溶液，TritonX-100的终浓度为0.1％。

所述解吸附剂可按如下方法配制：①称取1g TritonX-100，用10mL纯化水溶解，混匀，即为10％TritonX-100溶液；②称取4g柠檬酸钠，用纯化水溶解，加入10％TritonX-1000.4mL，补加纯化水至20mL，即为解吸附剂。

本发明还提供一种用于测定铝盐吸附型DTap-IPV联合疫苗中D-抗原含量的方法，其是利用所述解吸附剂处理待测疫苗，并测定混合液中的D-抗原含量。

所述方法包括以下步骤：

(1)将待测疫苗配制成溶液，并与解吸附剂混匀后孵育；

(2)采用酶联免疫吸附法检测(1)所得混合液中的D-抗原含量。