[发明专利]一种高纯度的米尔贝肟中间体（II）制备方法

说明书

本发明公开了一种高纯度的米尔贝肟中间体（II）制备方法，方法包括使米尔贝霉素（I）进行氧化反应，生产米尔贝肟中间体（Ⅱ），通过硅胶层析，结晶可制备出高纯度的米尔贝肟中间体（Ⅱ）。本发明方法工艺简单，且收率高，可制备出高纯度的米尔贝肟中间体（Ⅱ）。

技术领域

本发明涉及一种高纯度米尔贝肟中间体（Ⅱ）分离纯化方法，属于抗体内外寄生虫类药物分离纯化技术领域。

背景技术

米尔贝霉素(Milbemycin)于1967年由日本Sankyo公司的青木(Aoki)等人从筛选的链霉菌Streptomyces Hygroscopicus Subsp.AureoIacrimosus 的发酵液中发现的一类十六元大环内脂化合物，对各种螨虫、农业害虫以及园艺害虫(如鳞翅目的蚜虫、幼虫)都有很好的防治效果，并且对宠物犬类和猫类的致命寄生虫病(如犬恶丝虫病)等均有良好的治疗效果。

米尔贝肟(Milbemycin Oxime)是米尔贝霉素A3和A4在C5位的羟基变成肟基的衍生物，它们是一类大环内酯类抗体内外寄生虫类药物，是一种主要用做治疗犬类的抗虫药，米尔贝肟对治疗和预防大部分比较常见寄生虫疾病都有极好的效果，通常用来预防和治疗由线虫、恶丝虫病等引发的猫、狗等疾病。米尔贝肟首次在国内开始应用是在1997年由台湾诺华公司推出的商品名为倍脉心(成分为Milbemycin Oxime)的抗虫药,作为犬科动物和猫科动物预防肠内寄生虫和其它寄生虫的内服药，正是由于其对哺乳动物体内外寄生虫都具有很好的驱杀作用，并且对一些阿维菌素敏感的犬类几乎无任何毒副作用，使得其应用价值和研究前景越来越受到世界的广泛重视。

米尔贝肟中间体（Ⅱ）是米尔贝霉素A3和A4在C5位的羟基变成酮基的衍生物。高纯度的米尔贝肟中间体（Ⅱ）可用于米尔贝肟生产过程中中间体的检测，以确保产品的合格性。目前国内尚未有高纯度的米尔贝肟中间体发明专利，并且通常高纯度的米尔贝肟中间体（Ⅱ）是实验室通过制备柱进行分离纯化制备，该工艺所用的设备昂贵，生产量低。本发明方法分离纯度高，成本低、产品收率高，可实现工业化生产。

发明内容

本发明提供了一种高纯度米尔贝肟中间体（Ⅱ）的分离纯化法，将链霉素发酵产生的发酵液经固液分离，浸取后得到米尔贝霉素（I）溶液，经氧化反应得到的米尔贝肟中间体（Ⅱ）溶液，经过浓缩溶解、硅胶层析分离，得到的洗脱液经过浓缩、结晶、抽滤干燥得到的米尔贝肟中间体（Ⅱ）纯度在97%以上。该方法分离纯度高，成本低、产品收率高。

一种高纯度米尔贝肟中间体（Ⅱ）的分离纯化法，其特征在于步骤如下:

（1）用于硅胶层析的样品米尔贝肟中间体（Ⅱ）溶液纯度≥65.0%。

（2）米尔贝肟中间体（Ⅱ）溶液浓缩，控制浓缩罐温度40-50℃，真空度≤-0.09MPa，直至所有米尔贝肟中间体（Ⅱ）溶液浓缩至冷凝器下视镜无液体流出。

（3）溶解：浓缩结束后往浓缩罐中加入产品量2～3倍重量的90~95%正庚

烷-丙酮/正己烷-丙酮/正庚烷-二氯甲烷溶液。

（4）干法装硅胶层析柱，将溶解液湿法上柱。

（5）洗脱：用流动相浓度为90~98%正庚烷-丙酮/正己烷-丙酮/正庚烷-二氯甲烷溶液对硅胶柱进行洗脱。

（6）洗脱结束后，将合格的洗脱液真空浓缩，控制浓缩罐温度40-50℃，

真空度≤-0.09MPa，直至所有米尔贝肟中间体（Ⅱ）溶液浓缩至冷凝器下视镜无液体流出。

（7）浓缩结束后，往浓缩罐中加入产品量3～4倍重量的90~95%正庚烷-

丙酮/正庚烷-乙腈/正庚烷-三氯甲烷溶液，搅拌升温至60～65℃溶解至澄清，降温至10～20℃，保温结晶2小时以上。