[发明专利]一种癌胚抗原(CEA)免疫检测试剂及其制备和检测方法

说明书

本发明涉及一种癌胚抗原(CEA)检测试剂及其制备和检测方法，属于免疫检测领域。具体涉及一种癌胚抗原均相酶免疫检测试剂及其制备和检测方法，所述试剂包括：癌胚抗原特异性抗体、用于检测癌胚抗原特异性抗体‑癌胚抗原复合物的指示剂；上述指示剂选自酶试剂，所述酶试剂由癌胚抗原酶标偶联物和酶的底物组成，酶标偶联物为葡萄糖脱氢酶‑癌胚抗原酶标偶联物，酶的底物为葡萄糖。本发明癌胚抗原免疫检测试剂灵敏度高、重复性好、稳定性强，并且可以在全自动生化分析仪上同时测定多个样本，实现癌胚抗原的高通量、快速化测定，有利于临床大规模推广使用。

技术领域

本发明涉及一种癌胚抗原检测试剂及其制备和检测方法，具体涉及一种癌胚抗原均相酶免疫检测试剂及其制备和检测方法。

技术背景

癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen, CEA)是由Gold和Freeman等于1965年首次于结肠癌和胎儿肠组织中发现。在胚胎发育过程中，CEA作为细胞表面蛋白，主要形成于胃肠道和胰腺，并分泌于体液中。成人CEA的合成并未完全停止，也存在于许多与胃肠或肺来源有关的外胚层组织的癌细胞中。CEA主要在肝脏内灭活，半衰期为14d，生物活性目前仍不清楚，但可能与免疫抑制细胞的粘附有关。

CEA是由45%-55%糖和50%蛋白质组成的瘤胎糖蛋白，相对分子质量为180-200kD，有9个抗原决定簇，其基因家族包括2个亚组的17个活化基因，属于非器官特异性肿瘤相关抗原。血清CEA升高主要见于：70%-90%的结肠腺癌患者CEA阳性，在其他恶性肿瘤中的阳性率顺序为胃癌、胰腺癌、小肠腺癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、泌尿系癌肿。良性肿瘤、炎症和退行性疾病（例如胆汁淤积、结肠息肉、酒精性肝硬化患者、慢性肝炎、胰腺炎、溃疡性结肠炎、肺气肿）CEA含量会轻度或中度上升，但通常不超过10ng/ml。吸烟者中约有30%CEA大于5ng/ml。CEA可以作为良性与恶性肿瘤的鉴别诊断依据，其测定还用于指导肿瘤治疗及随访，能为病情判断、预后及疗效观察提供重要依据。

检测CEA的常用方法有放射免疫法(RIA)、化学发光法、电化学发光法、金标记免疫渗滤层析、时间分辨荧光免疫分析法及酶联免疫吸附法(ELISA)等。放射免疫法最早用于CEA的检测，但在检测过程中容易产生放射性污染，且准确度低，需要专业的放射免疫仪器，在普通实验室难以开展，现阶段已很少使用。其余方法中，或者步骤繁琐，或者耗时较长，或者需要复杂昂贵的仪器设备，或者需要专业操作人员等，都不利于广泛应用于临床检测。

均相酶免疫检测法灵敏度高、重复性好、稳定性强，操作简便并且可以在全自动生化分析仪上同时测定多个样品，实现癌胚抗原的高通量、快速化测定，有利于临床大规模推广使用。

发明内容

本发明为了克服现有技术存在的缺陷，采用癌胚抗原特异性抗体及指示剂制备出癌胚抗原均相酶免疫检测试剂，该试剂可与各种类型自动生化分析仪联用，有助于实现癌胚抗原高通量、快速化检测，且对检测人员要求不高，有利于临床推广。

本发明的目的在于提供一种癌胚抗原均相酶免疫检测试剂，其特征在于：含有癌胚抗原特异性抗体和指示剂。

所述指示剂为酶试剂，其由癌胚抗原酶标偶联物和酶的底物组成，酶标偶联物为葡萄糖脱氢酶-癌胚抗原酶标偶联物，酶的底物为葡萄糖。

所述的酶标偶联物为葡萄糖脱氢酶和癌胚抗原偶联形成。

一种癌胚抗原免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1) 均相酶底物溶液的制备：将NAD⁺和葡萄糖用TRIS缓冲液溶解，配制得到均相酶底物；

(2) 葡萄糖脱氢酶-癌胚抗原酶标偶联物的制备：制备葡萄糖脱氢酶溶液(GDH)，将GDH与癌胚抗原偶联，纯化偶联产物；

(3) 癌胚抗原均相酶免疫检测试剂的制备：