[发明专利]一种癌胚抗原(CEA)免疫检测试剂及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种癌胚抗原(CEA)免疫检测试剂，其特征在于，包括：癌胚抗原特异性抗体、用于检测癌胚抗原特异性抗体-癌胚抗原复合物的指示剂。

2.根据权利要求1所述的癌胚抗原免疫检测试剂，其特征在于，所述用于检测癌胚抗原特异性抗体-癌胚抗原复合物的指示剂选自酶试剂、放射性同位素、荧光试剂或发光试剂中的一种，优选为酶试剂；所述的酶试剂由癌胚抗原酶标偶联物和酶的底物组成，酶标偶联物为葡萄糖脱氢酶-癌胚抗原酶标偶联物，酶的底物为葡萄糖。

3.根据权利要求2所述的癌胚抗原免疫检测试剂，其特征在于，所述酶标偶联物为葡萄糖脱氢酶和癌胚抗原偶联形成。

4.一种癌胚抗原免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1) 均相酶底物溶液的制备：将NAD⁺和葡萄糖用TRIS缓冲液溶解，配制得到均相酶底物；

(2) 葡萄糖脱氢酶-癌胚抗原酶标偶联物的制备：制备葡萄糖脱氢酶溶液(GDH)，将GDH与癌胚抗原偶联，纯化偶联产物；

(3) 癌胚抗原均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1(R1)：由TRIS缓冲液、癌胚抗原特异性抗体、均相酶底物混合而成；

试剂2(R2)：由TRIS缓冲液、葡萄糖脱氢酶-癌胚抗原酶标偶联物混合而成。

5.根据权利要求4所述的一种癌胚抗原免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1)具体过程为：

将氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD⁺、葡萄糖用55mM、pH=8.0的TRIS缓冲液溶解制成均相酶底物；所述NAD⁺与葡萄糖的最终浓度均为22.50 mM。

6.根据权利要求4所述的一种癌胚抗原免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)具体过程为：

1) 葡萄糖脱氢酶溶液的制备：

a. 称取8mg MgCl₂、100mg NaCl 和15.6mg的葡萄糖脱氢酶(100KU)，室温下按顺序溶解于18ml 50mM pH=9.0的TRIS缓冲液；

b. 按顺序加入337.5mg还原态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NADH、140.2mg葡萄糖以及1.125mL卡必醇；

c. 逐滴加入3mL的二甲亚砜；

2) 葡萄糖脱氢酶-癌胚抗原酶标偶联物的制备：

将癌胚抗原逐滴加入上述制得的葡萄糖脱氢酶溶液中，2-8℃搅拌过夜；所述癌胚抗原与葡萄糖脱氢酶的质量比为1:1000-1000:1；最后，通过G-25凝胶层析柱纯化酶标偶联物，于2-8℃下储存。

7.根据权利要求4所述的一种癌胚抗原免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤(3)具体过程为：

试剂1：将癌胚抗原抗体加入到权利要求5所述的均相酶底物中，抗体与均相酶底物体积比为1:100-1:10000，优选1:1000；

试剂2：将葡萄糖脱氢酶-癌胚抗原酶标偶联物加到120mM pH=8.2的TRIS缓冲液中，上述偶联物与TRIS缓冲液的体积比为1:100-1:10000，优选1:3000。

8.利用权利要求1至3任意一项所述的癌胚抗原免疫检测试剂的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1) 将待测样本与癌胚抗原特异性抗体接触；

2) 根据待测样本中癌胚抗原与癌胚抗原特异性抗体的结合情况，利用指示剂判断样本中癌胚抗原的含量；所述待测样本为各种生理样本，例如血清、血浆、唾液或尿液等；优选的，待测样本为EDTA抗凝血浆。