[发明专利]一种四氢大麻酚免疫检测试剂及其制备和检测方法

说明书

本发明公开了一种四氢大麻酚免疫检测试剂及其制备和检测方法。包括：酶标四氢大麻酚、用于检测四氢大麻酚抗体‑酶标四氢大麻酚复合物的指示试剂；上述酶标四氢大麻酚由四氢大麻酚和葡萄糖脱氢酶偶联而成。本发明的四氢大麻酚免疫检测试剂可以精确快速地确定人体血液等样品中四氢大麻酚含量。与市场上现有的检测试剂相比，本发明检测试剂具有方便快速、灵敏度高、特异性强、定量准确等优点，有利于临床的推广使用。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体是一种四氢大麻酚免疫检测试剂及其制备和检测方法。

背景技术

大麻属于桑科植物，是一种多用途的古老栽培作物，可对中枢神经产生强烈刺激，与海洛因、可卡因并称“世界三大毒品”，成瘾性强。四氢大麻酚(Tetrahydrocannabinol，THC)是大麻中的主要成分，是一个分子量为314Da的小分子半抗原物质。THC在治疗疟疾、便秘和风湿疾病以及疼痛等方面具有良好疗效，并且最近研究发现四氢大麻酚具有广泛的心血管活性。但是，长期吸食大麻者，由于蓄积中毒会造成行为毒性反应，极易发生暴力和自杀倾向，已在世界范围内带来了严重的社会问题，故开展针对大麻毒品的分析研究工作具有非常重要的意义。

目前检测四氢大麻酚的常用方法有：酶联免疫吸附测定（ELISA）、放射免疫测定（RIA）、气相色谱－质谱联用法、液相色谱及液相色谱－质谱联用法等。其中，ELISA法定量准确性差、操作时间长、自动化程度低，多用于定性检测；RIA法所需时间较长，检测结果不稳定，重复性比ELISA差，且存在放射性污染危险。气相色谱技术较为成熟，应用也比较普遍，但受到流动相必须是气体的限制，并且高温往往使四氢大麻酚脱羧从而导致其定量分析结果偏高。高效液相色谱法分析成本高，液相色谱仪价格及日常维护费用贵，分析时间一般比气相长。

本发明采用的方法为均相酶免疫检测法，其优点为：操作简便、快速、灵敏度高、准确性好、适合于自动化，应用广泛，并且用全自动生化分析仪对小分子物质和大分子物质都能高通量快速测定。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中四氢大麻酚检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本发明提供了一种快速、灵敏度高、准确检测出待测样本中四氢大麻酚含量的四氢大麻酚均相酶免疫检测试剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种四氢大麻酚免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标四氢大麻酚、用于检测四氢大麻酚抗体-酶标四氢大麻酚复合物的指示试剂；上述酶标四氢大麻酚由四氢大麻酚和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

作为本发明进一步的方案，所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-四氢大麻酚偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

作为本发明进一步的方案，所述的葡萄糖脱氢酶-四氢大麻酚偶联物由葡萄糖脱氢酶与四氢大麻酚偶联形成。

作为本发明进一步的方案，所述的一种四氢大麻酚免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-四氢大麻酚偶联物的制备：葡萄糖脱氢酶（GDH）与四氢大麻酚的偶联，纯化偶联的酶标四氢大麻酚；

（2）四氢大麻酚均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由四氢大麻酚抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

作为本发明进一步的方案，所述的一种四氢大麻酚免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

1）葡萄糖脱氢酶（GDH）与四氢大麻酚的偶联

a. 准确称取10-50 mg GDH，并用5-15 mL醋酸钠缓冲液溶解在圆底烧瓶中；