[发明专利]一种四氢大麻酚免疫检测试剂及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种四氢大麻酚免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标四氢大麻酚、用于检测四氢大麻酚抗体-酶标四氢大麻酚复合物的指示试剂；

根据权利要求1所述的四氢大麻酚的免疫检测试剂，其特征在于：所述酶标四氢大麻酚由四氢大麻酚和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

2.根据权利要求1所述的四氢大麻酚免疫检测试剂，其特征在于：所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-四氢大麻酚偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

3.一种四氢大麻酚免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-四氢大麻酚偶联物的制备：葡萄糖脱氢酶（GDH）与四氢大麻酚的偶联，纯化偶联的酶标四氢大麻酚；

（2）四氢大麻酚均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由四氢大麻酚抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-四氢大麻酚偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

4.根据权利要求5所述的一种四氢大麻酚免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

1）葡萄糖脱氢酶（GDH）与四氢大麻酚的偶联

a. 准确称取10-50 mg GDH，并用5-15 mL醋酸钠缓冲液溶解在圆底烧瓶中；

b. 将100-500 mg四氢大麻酚溶解于二甲基亚砜中，并逐滴加入到上述圆底烧瓶中；

c. 在上述b溶液中快速加入10-100 μL的甲醛溶液，20-50℃水浴轻摇6-12小时。

5.2）纯化偶联的酶标四氢大麻酚

通过G-25凝胶层析柱纯化偶联的酶标四氢大麻酚，得到葡萄糖脱氢酶-四氢大麻酚偶联物，并于2-8℃下储存。

6.根据权利要求5所述的一种四氢大麻酚免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，步骤（2）的具体过程如下：

试剂1的制备：将2-5 g氧化态的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸NAD、0.5-3 g葡萄糖用0.5-2 L磷酸盐缓冲液溶解制成均相酶底物；将四氢大麻酚抗体加到上述均相酶底物中，抗体与均相酶底物的体积比为1:100～1:10000；

试剂2的制备：将制备的葡萄糖脱氢酶-四氢大麻酚偶联物加到磷酸盐缓冲液中，上述偶联物与磷酸盐缓冲液的体积比为1:100～1:10000。

7.利用权利要求1至4任意一项所述的四氢大麻酚免疫检测试剂的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将待测样本与四氢大麻酚抗体接触；

2）根据待测样本中四氢大麻酚与四氢大麻酚抗体的结合情况，利用指示试剂判断样本中四氢大麻酚的含量；所述待测样本为血清、血浆、唾液或尿液。