[发明专利]从羊栖菜中分离制备岩藻甾醇的方法

说明书

本发明公开了一种从羊栖菜中分离制备岩藻甾醇的方法，包括以下步骤：将羊栖菜粉末用有机溶剂浸提，将提取液浓缩后干燥，得岩藻甾醇粗提物；将L‑柠檬烯、甲醇和水配制成互不相溶的两相溶剂；将两相溶剂中的上相与下相按照1:1的体积比混合，然后加入岩藻甾醇粗提物，得到岩藻甾醇粗提物溶液；将两相溶剂中的上相注入逆流色谱仪分离柱内作为固定相，将岩藻甾醇粗提物溶液注入逆流色谱仪的进样环中，开启逆流色谱仪，注入两相溶剂中的下相作移动相，收集保留时间为40～50min的组分，旋转蒸发后得到岩藻甾醇。采用本发明的方法能从羊栖菜中分离制备获得高纯度的岩藻甾醇。

技术领域

本发明涉及羊栖菜中岩藻甾醇单体的逆流色谱分离制备方法，特别是采用逆流色谱法从羊栖菜粗提物中分离制备单体岩藻甾醇的方法。

背景技术

岩藻甾醇(Fucosterol)，又名24-亚乙基胆甾-5烯-3β醇，属于植物甾醇的一种，存在于多类海藻中，一般呈现出白色针状晶体，其分子式为C₂₉H₄₈O，大多通过非极性试剂以及硅胶柱层色谱进行分离提取，以质谱及核磁技术测定其化学结构(化学结构如式I所示)。

羊栖菜是一种暖温带-亚热带性海藻，广泛分布于东亚地区多个海域，因多汁肉厚，营养价值高等特点，已成为沿海居民喜爱的传统佳肴。在日本，羊栖菜被冠以“海上参”及“长寿菜”的称号，身价为海带的数倍。以羊栖菜作为原材料，已经成功地研制出一系列的调味品、休闲食品、保健食品以及相关的药品等。此外，作为传统的中草药，羊栖菜与海蒿子已被《中国药典》收藏为药用。岩藻甾醇(结构式如式Ⅰ所述)是羊栖菜中重要的生物活性物质，是植物甾醇的一种，相关药理学试验表明其具有促进生物内环境稳定、抗癌、调节胆固醇、降低血糖、消炎及抗氧化等多种生理功能。岩藻甾醇还可以作为药物及激素的合成原材料，如氢化可的松、雄性及雌性激素等。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从羊栖菜中分离制备高纯度岩藻甾醇的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种从羊栖菜中分离制备岩藻甾醇的方法，包括以下步骤：

1)、将羊栖菜粉末用有机溶剂浸提，将提取液旋转蒸发浓缩成浸膏，将所得浸膏干燥(于60±10℃烘干100～140分钟)，得岩藻甾醇粗提物(为浅棕色的粉末)；

2)、将L-柠檬烯、甲醇和水按照10:8.5～9.5:0.9～1.1的体积比配制后倒入分液器中，形成互不相溶的两相溶剂；

3)、将两相溶剂中的上相与下相按照1:1的体积比混合，得混合剂；将步骤1)所得的岩藻甾醇粗提物溶于所述混合剂中，得到岩藻甾醇粗提物溶液，所述岩藻甾醇粗提物与混合剂的料液比为0.3～0.5g/9～11ml；

4)、将步骤2)所得的两相溶剂中的上相注入逆流色谱仪分离柱内作为固定相，将步骤3)所得的岩藻甾醇粗提物溶液注入逆流色谱仪的进样环中，开启逆流色谱仪，注入两相溶剂中的下相作移动相，移动相的流速为2.5±0.2ml/min，收集保留时间为40～50min的组分，旋转蒸发(温度为45±5℃，至旋干)后得到岩藻甾醇(为纯化的岩藻甾醇单体)。

备注说明：注入流动相后，岩藻甾醇便在逆流色谱仪内进行连续的分配，通过紫外检测器的在线监测，收集、合并流出物(收集保留时间为40～50min的组分)。

作为本发明的从羊栖菜中分离制备岩藻甾醇的方法的改进：

所述步骤1)中的浸提为：按照1kg/1～2L的料液比，在羊栖菜粉末中加入作为溶剂的无水乙醇，于回流条件下浸提2±0.5小时。

作为本发明的从羊栖菜中分离制备岩藻甾醇的方法的进一步改进：