[发明专利]一种苯二氮卓免疫检测试剂及其制备和检测方法

说明书

本发明公开了一种苯二氮卓免疫检测试剂及其制备和检测方法。包括：酶标苯二氮卓、用于检测苯二氮卓抗体‑酶标苯二氮卓复合物的指示试剂；上述酶标苯二氮卓由苯二氮卓和葡萄糖脱氢酶偶联而成。本发明的苯二氮卓免疫检测试剂可以精确快速地确定人体血液等样品中苯二氮卓含量。与市场上现有的检测试剂相比，本发明检测试剂具有方便快速、灵敏度高、特异性强、定量准确等优点，有利于临床的推广使用。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体是一种苯二氮卓免疫检测试剂及其制备和检测方法。

背景技术

苯二氮卓类(Benzodiazepines，BZD)是一类作用于中枢神经系统的镇静剂，药物种类很多，多为1，4-苯并二氮的衍生物，其基本结构是由两个苯环和一个含有7个原子的杂环组成。具有镇静催眠、抗焦虑、抗惊厥、肌肉松弛等作用，且毒性较小。然而，大剂量使用苯二氮卓类药物会致共济失调，过量急性中毒可致昏迷和呼吸抑制，久服会产生身体和精神依赖性，产生依赖性的风险随剂量的增加及治疗期的延长而增加。一旦出现身体依赖性，立即停药会出现戒断症状，包括头痛、肌肉痛、极度焦虑紧张、烦躁、兴奋和谵妄。严重时会出现失眠、意识障碍、失去理智、听觉过敏、麻木、四肢麻刺感，出现幻觉和癫痫发作。

目前检测苯二氮卓的常用方法有：高效液相色谱分析（HPLC）、气相色谱-质谱联用（GC-MS）、紫外分光光度法和荧光分光光度法等。其中，HPLC法和GC-MS法费时且不易自动化；紫外分光光度法和荧光分光光度法，检测结果准确性差，对样品的纯度要求较高，还需要昂贵的仪器设备。

本发明采用的方法为均相酶免疫检测法，其优点为：操作简便、快速、灵敏度高、准确性好、适合于自动化，应用广泛，并且用全自动生化分析仪对小分子物质和大分子物质都能高通量快速测定。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中苯二氮卓检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本发明提供了一种快速、灵敏度高、准确检测出待测样本中苯二氮卓含量的苯二氮卓均相酶免疫检测试剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种苯二氮卓免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标苯二氮卓、用于检测苯二氮卓抗体-酶标苯二氮卓复合物的指示试剂；上述酶标苯二氮卓由苯二氮卓和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

作为本发明进一步的方案，所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-苯二氮卓偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

作为本发明进一步的方案，所述的一种苯二氮卓免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-苯二氮卓偶联物的制备：苯二氮卓半抗原的制备，葡萄糖脱氢酶（GDH）与苯二氮卓半抗原偶联，纯化偶联的酶标抗原。

（2）苯二氮卓均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由苯二氮卓抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

作为本发明进一步的方案，所述的一种苯二氮卓免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

1）苯二氮卓半抗原的制备

a. 将1-10 g苯二氮卓溶于10-100 mL无水吡啶中，加入乙酸酐，室温静置12小时以上，减压浓缩，蒸干后称重，得产物A；

b. 用20-100 mL二甲基甲酰胺溶解50-150 g产物A，再加入5-30 mL 浓度为1M的盐酸，室温静置12小时以上，然后用乙醚萃取，收集有机相用氢氧化钠水溶液萃取，继续收集有机相减压浓缩，加入少量石油醚，蒸干得产物B；