[发明专利]一种同时检测多种A组人类肠道病毒的引物组合及其应用

权利要求书

1.一种用于同时检测多种A组人类肠道病毒的荧光定量PCR引物组合，其特征在于，所述引物组合包括以下引物对：

引物对1：上游引物如SEQ ID No.1所示，下游引物如SEQ ID No.2所示；

引物对2：上游引物如SEQ ID No.4所示，下游引物如SEQ ID No.5所示；

引物对3：上游引物如SEQ ID No.7所示，下游引物如SEQ ID No.8所示；

引物对4：上游引物如SEQ ID No.10所示，下游引物如SEQ ID No.11所示。

2.如权利要求1所述的引物组合，其特征在于，所述引物对还可以与检测探针同时使用；优选的，所述检测探针包括以下探针：

探针1，序列为SEQ ID No.3或其互补序列；探针2，序列为SEQ ID No.6或其互补序列；

探针3，序列为SEQ ID No.9或其互补序列；探针4，序列为SEQ ID No.12或其互补序列；优选的，所述探针为Taqman探针；

更优选的，探针的5’端使用荧光基团FAM、HEX、Texas Red或CY5进行修饰，探针的3’端使用BHQ1、BHQ2或BHQ3进行修饰。

3.权利要求1或2所述的引物组合在制备检测A组人类肠道病毒的试剂或试剂盒中的用途；或在制备检测由A组人类肠道病毒引起的疾病的试剂或试剂盒中的用途，优选的，所述疾病为手足口病。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述A组人类肠道病毒为柯萨奇病毒A组6型(CVA6)、柯萨奇病毒A组10型(CVA10)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)和肠道病毒A组71型(EV71)。

5.一种同时检测多种A组人类肠道病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的引物组合。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括检测探针；优选的，所述检测探针包括以下探针：

探针1，序列为SEQ ID No.3或其互补序列；探针2，序列为SEQ ID No.6或其互补序列；探针3，序列为SEQ ID No.9或其互补序列；探针4，序列为SEQ ID No.12或其互补序列；优选的，所述探针为Taqman探针。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述探针的5’端使用荧光基团FAM、HEX、Texas Red或CY5进行修饰，探针的3’端使用BHQ1、BHQ2或BHQ3进行修饰。

8.根据权利要求5-7的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：用于绘制标准曲线的系列标准品溶液、含dNTP和Mg2+的PCR反应预混液和DNA聚合酶。

9.一种同时检测多种A组人类肠道病毒的方法，所述方法包括利用权利要求1的引物组合对待测样品的核酸进行扩增的步骤，所述A组人类肠道病毒为柯萨奇病毒A组6型(CVA6)、柯萨奇病毒A组10型(CVA10)、柯萨奇病毒A组16型(CVA16)和肠道病毒A组71型(EV71)。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法还包括利用检测探针对扩增产物进行杂交的步骤；优选的，所述探针包括：

探针1，序列为SEQ ID No.3或其互补序列；探针2，序列为SEQ ID No.6或其互补序列；

探针3，序列为SEQ ID No.9或其互补序列；探针4，序列为SEQ ID No.12或其互补序列。