[发明专利]一种用于三叶苷分离纯化的改性树脂及其在木姜叶柯中的应用

说明书

本发明公开了一种改性树脂及其在分离纯化木姜叶柯中三叶苷的应用。以传统树脂为起始树脂，经氯甲基化后与氨基葡萄糖盐酸盐反应得到氨基葡萄糖改性树脂。将木姜叶柯嫩叶干燥、粉碎、有机溶剂提取、碱化、萃取，萃取液经氨基葡萄糖改性树脂上柱纯化，浓缩结晶得到高纯度的三叶苷产品。经氨基葡萄糖改性后的树脂对木姜叶柯甜茶中三叶苷有较高的选择性，容易洗脱，减少了树脂的用量，改性树脂经乙醇洗脱之后，再生性能较好，有利于循环使用。

技术领域

本发明涉及天然产物提取分离技术领域，具体涉及一种分离纯化用的树脂及其在木姜叶柯中的应用。

背景技术

三叶苷，(Trilobatin,CAS NO.4192-90-9),是木姜叶柯甜茶中一种重要的黄酮类化合物，分子式C₂₁H₂₄O₁₀,相对分子质量436.413，其化学名称为1-[4-(β-D-Glucopyranosyloxy)-2,6-dihydroxyphenyl]-3-(4-hydroxyphenyl)-1-propanone。三叶苷属于二氢查尔酮类化合物，具有抑制与Ⅱ型糖尿病有关的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶活性，抗氧化性，清除自由基的活性，其甜度是蔗糖的300倍。在新药和功能性食品开发等方面具有广阔的应用前景。

专利201510358050.1报道了“一种大量分离天然甜味剂三叶苷的方法”，包括提取，分离纯化三叶苷的方法。该方法后续的分离采用的高速逆流萃取技术，成本高，不利于扩大化生产。

专利200910027421.2报道了“一种含三叶苷活性提取物及其用途”，包括提取方法以及用途等内容。分离方法采用的是传统树脂，消耗溶剂大，选择性不高，耗时较长。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种低成本、选择性高的用于高效分离纯化三叶苷的新型树脂，用该树脂来分离纯化三叶苷，树脂用量少，洗脱溶剂少，三叶苷回收率高，能有效降低生产成本。

为了解决上述问题，本发明采用传统树脂进行氯甲基化，然后与氨基葡萄糖盐酸盐反应得到新型树脂。对该类新型树脂的研究表明，该类树脂能高效选择性的吸附木姜叶柯甜茶提取液中的三叶苷，提取液中的三叶苷被选择性的吸附在新型树脂上，经梯度浓度乙醇溶液洗脱后可得到浓度较高的三叶苷洗脱液。将洗脱液碱化后经乙酸乙酯等低毒低成本溶剂萃取，可得高纯度的三叶苷。

该新型树脂具体制作步骤如下：

(1)商业树脂经预处理后，在体积为树脂质量5～10倍的二氯甲烷溶液中充分溶胀，加入质量为树脂质量1～2倍的氯化钠、质量为树脂质量0.5～2倍的氯化锌、体积为树脂质量0.5～1倍的氯甲基甲醚后回流搅拌10～40h，过滤、洗涤、干燥，得氯甲基化树脂；商业树脂优先选AB-8。

(2)将步骤(1)得到的氯甲基化树脂用无水乙醇浸泡12～24h，用蒸馏水洗至无醇味，再用1.0M HCl浸泡3h，洗至中性，然后用1.0M NaOH浸泡3h，再洗至中性后真空330K干燥8h。

(3)将步骤(2)中得到的树脂于体积为树脂质量10～20倍的DMF溶胀24～48h，加入质量为树脂质量2～3倍的氨基葡萄糖盐酸盐、质量为树脂质量2～4倍K₂CO₃。343～363K条件下恒温机械搅拌10～20h。反应结束后，过滤、水洗、醇洗、真空干燥，得到氨基葡萄糖修饰的树脂。

该新型树脂用于分离纯化木姜叶柯甜茶三叶苷的步骤如下：

a.木姜叶柯甜茶叶采摘、洗净、烘干、粉碎；

b.有机溶剂加热回流提取、碱性溶液萃取；

c.萃取液经新型树脂纯化；

d.30％-90％乙醇溶液洗脱、浓缩、结晶、干燥即得三叶苷产品。