[发明专利]凝血酶结合抗体分子及其用途

说明书

本发明涉及分离的抗体，其识别凝血酶的exosite 1表位，并选择性抑制凝血酶，而不促进出血。这些抗体分子可用于治疗和预防血栓形成、栓塞及其他由凝血酶介导的病症。

本发明是申请日为2012年12月14日、申请号为201280061294.8、发明名称为“凝血酶结合抗体分子及其用途”的分案申请。

技术领域

本发明涉及抑制凝血酶的抗体分子。

背景技术

血液凝固是防止受损血管出血(止血)的重要过程。然而，阻塞血液流经血管(血栓形成)或脱落后沉积在身体内别处的血管(血栓栓塞)的血凝块对健康是严重的威胁。

有很多抗凝血疗法可供治疗病理性血液凝固。这些疗法的通病是增加的出血风险(Mackman(2008)Nature 451(7181):914-918)。许多抗凝剂治疗窗口狭窄，介于阻止血栓形成和引起出血的剂量之间。该窗口经常进一步受限于个体病人中的反应差异。

发明内容

本发明涉及预料不到的发现，即识别凝血酶exosite 1表位的抗体分子选择性抑制凝血酶，而不促进出血。这些抗体分子可用于治疗和预防血栓形成、栓塞及其他由凝血酶介导的病症。

本发明一方面提供了分离的抗体分子，其特异性结合凝血酶的exosite 1。

分离的抗exosite 1抗体分子可在体内抑制凝血酶，而不促进或大幅促进出血(bleeding)或溢血(haemorrhage)，即该抗体分子不抑制或大幅抑制对血管损伤的正常生理反应(即止血)。例如，止血不会被抗体分子抑制或会被其最低程度地抑制(即微小程度地抑制，不会影响病人的健康或需要进一步干预)。出血不会被抗体分子增加或会被其最低程度地增加。

exosite 1(又名“阴离子结合exosite 1”和“纤维蛋白原识别exosite”)是凝血酶分子上典型的次级结合位点(参见例如James A.Huntington,2008,Structural Insightsinto the Life History of Thrombin,in Recent Advances in Thrombosis andHemostasis 2008,editors；K.Tanaka and E.W.Davie,Springer Japan KK,Tokyo,pp.80-106)。exosite 1形成于成熟凝血酶中，但不形成于凝血酶原中(参见例如Anderson et al(2000)JBC 2775 16428-16434)。

exosite 1参与识别凝血酶底物，例如纤维蛋白原，但远离催化活性位点。多种凝血酶结合因子结合exosite 1，包括抗凝十二肽水蛭原(hirugen)(Naski et al1990JBC265 13484-13489)、因子V、因子VIII、血栓调解蛋白(蛋白C和TAFI激活的辅因子)、纤维蛋白原、PAR1和纤维蛋白(因子XIII激活的辅因子)。

抗exosite 1抗体可与成熟的人凝血酶exosite 1结合。人前凝血酶原(preprothrombin)的序列如SEQ ID NO:1所示。人凝血酶原具有SEQ ID NO:1的44-622残基的序列。成熟的人凝血酶原具有314-363残基(轻链)和364-622残基(重链)的序列。

在一些实施方案中，抗exosite 1抗体也可结合来自其他物种的成熟凝血酶的exosite 1。来自其他物种的凝血酶序列是本领域已知的，并可在公共数据库如Genbank中获得。来自其他物种的凝血酶序列中的对应残基可利用序列比对工具很容易地鉴别。

本文所示凝血酶残基的编号方案是本领域常规的，基于糜蛋白酶模板(Bode W etal EMBO J.1989Nov；8(11):3467-75)。凝血酶具有相对于糜蛋白酶的插入环，用小写字母顺序标出。