[发明专利]一种HER2基因检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种HER2基因检测试剂盒及其应用。具体地，发明公开一种HER2基因定量检测试剂盒，其包括PCR反应缓冲液、Taq酶、dNTP混合液、包含HER2目的基因片段和Fas参照基因片段的标准品、目的基因特异性引物和荧光探针、参照基因特异性引物和荧光探针、阴性对照和阳性对照。本发明所提供的检测方法和检测试剂盒具有使用方便、检测效率高，其对于HER2阳性的乳腺癌的诊断，抗该疾病药物的研究开发、质量控制乃至临床应用都具有重要的意义。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种HER2基因检测试剂盒及应用。

背景技术

人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2，HER2)基因，即c-erbB-2基因，定位于染色体17q12-21.32上，编码相对分子质量为185000的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性。正常人体情况下，HER2是单拷贝基因，但是在乳腺癌及胃癌肿瘤细胞中，常有染色体异质性现象发生，如17号染色体数量增加，更常见的是17号染色体上HER2基因及其上下游300-1000M的DNA序列经过基因重排插入到其他染色体上，由此导致HER2基因的拷贝数增加，进而导致肿瘤细胞表面HER2蛋白过表达。

正确检测和评定乳腺癌的HER2蛋白表达和基因扩增状态对乳腺癌的临床治疗和预后判断至关重要，不仅涉及患者是否适合针对HER2的靶向治疗，并且对内分泌治疗、化疗方案的选择及预后评估起指导作用。美国临床肿瘤学会及中华医学病例学会发布的《乳腺癌治疗指南》及《乳腺癌HER2检测指南》均明确提出在乳腺癌靶向治疗前必须进行HER2检测。

目前HER2检测方法主要包括免疫组化(IHC)及原位杂交(ISH，包括FISH、CISH、SISH)两类。IHC是利用免疫显色反应在蛋白水平上对福尔马林固定的石蜡切片进行HER2过表达检测，而ISH则是利用特殊标记的核酸探针与石蜡切片上固定的细胞核内HER2基因DNA靶序列杂交，在核酸水平上检测HER2基因的扩增情况，当IHC检测结果为2+时还需要进一步进行FISH检测确诊。以上两类方法在临床检测中操作繁琐，耗时较长，价格昂贵，在一般的临检实验室中很难进行标准化。

实时荧光定量PCR具有线性检测范围大、检测速度快、通量高、封闭检测无污染、灵敏度高等诸多优点，已经在核酸拷贝数定量方面有了诸多临床应用。例如罗氏的HER2基因扩增检测试剂盒，其原理是根据HER2基因与参照基因扩增反应的Ct值差异(经参照样本的ΔCt校正后即为ΔΔCt)比较拷贝数差异，但不同PCR反应的体系之间扩增效率以及PCR设备孔间存在差异，此方法难以满足临床HER2检测的稳定性、精密度的要求。另外，赛默飞世尔利用一系列不同浓度梯度的目的基因及参照基因绘制标准曲线，分别计算样本中目的基因、参照基因相对于各自标准品的拷贝数，从而获取样品基因定量拷贝数，但由于标准品的绝对定量难度高，标准品浓度误差范围较大，使得目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制，会造成实验结果出现较大误差。

因此，一种便捷高效的HER-2基因检测方法仍是目前所急需的。

发明内容

本发明的发明人经过大量的实验研究，开发了一种实时荧光定量PCR检测试剂盒，该试剂盒可简便高效进行实时荧光定量PCR检测HER2基因。具体地，发明公开了：

1、一种HER2基因定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：PCR反应缓冲液、Taq酶、dNTP混合液、包含目的基因片段和参照基因片段的标准品、目的基因特异性引物和荧光探针、参照基因特异性引物和荧光探针、阴性对照和阳性对照，所述目的基因为人HER2基因，所述参照基因为人Fas基因。

2、如上述1所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品目的基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述标准品参照基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。