[发明专利]一种HER2基因检测试剂盒及其应用在审
| 申请号： | 201711379336.3 | 申请日： | 2017-12-20 |
| 公开（公告）号： | CN109943634A | 公开（公告）日： | 2019-06-28 |
| 发明（设计）人： | 黎健荣;董玮婷;胡湘丽;路玲玉;耿妍 | 申请（专利权）人： | 上海抗体药物国家工程研究中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6886 | 分类号： | C12Q1/6886;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201203 上海市浦东*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测试剂 目的基因 荧光探针 定量检测试剂盒 基因特异性引物 特异性引物 基因片段 疾病药物 临床应用 阳性对照 阴性对照 标准品 检测 乳腺癌 质量控制 应用 诊断 开发 研究 | ||
1.一种HER2基因定量检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：PCR反应缓冲液、Taq酶、dNTP混合液、包含目的基因片段和参照基因片段的标准品、目的基因特异性引物和荧光探针、参照基因特异性引物和荧光探针、阴性对照和阳性对照，所述目的基因为人HER2基因，所述参照基因为人Fas基因。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品目的基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述标准品参照基因片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述标准品是由目的基因扩增区域与参照基因扩增区域按等比例连接而成的质粒载体。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述质粒载体为pMD18-T载体。
5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述质粒载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。
6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述目的基因的特异性上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，特异性下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示，探针核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述参照基因的特异性上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示，特异性下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示，探针核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示。
8.一种实时荧光定量PCR检测HER2基因方法，其特征在，所述检测通过使用上述权利要求1-8任一所述的试剂盒完成。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的试剂盒包括：PCR反应缓冲液、Taq酶、dNTP混合液、包含目的基因片段和参照基因片段的标准品、目的基因特异性引物和荧光探针、参照基因特异性引物和荧光探针、阴性对照和阳性对照，所述目的基因为人HER2基因，所述参照基因为人Fas基因，所述标准品是由目的基因扩增区域与参照基因扩增区域按等比例连接而成的质粒载体，所述质粒载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，所述目的基因的特异性上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，特异性下游引物核苷酸序列如SEQ IDNO:10所示，探针核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示；所述参照基因的特异性上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示，特异性下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示，探针核苷酸序列如SEQ ID NO:14所示。
10.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将标准品按照浓度梯度稀释；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品同步进行实时荧光定量PCR扩增；
(3)绘制参照基因和目的基因的标准曲线，根据目的基因与参照基因各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，获得目的基因拷贝数相对定量检测结果。
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