[发明专利]骨硬化蛋白单链抗体的制备方法和用途有效
| 申请号： | 201711379304.3 | 申请日： | 2017-12-18 |
| 公开（公告）号： | CN108101984B | 公开（公告）日： | 2019-10-15 |
| 发明（设计）人： | 姜华;姚琦;唐佩福 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军总医院 |
| 主分类号： | C07K16/18 | 分类号： | C07K16/18;C12N15/13;C12N15/85;A61K39/395;A61P19/10;A61P19/08 |
| 代理公司： | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人： | 张建纲 |
| 地址： | 100853*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 制备 单链抗体 骨硬化 蛋白 聚丙烯酰胺凝胶电泳 重链可变区基因 抗原结合活性 单克隆抗体 可变区基因 可溶性表达 杂交瘤细胞 表达产物 表达蛋白 表达载体 反应活性 抗体轻链 重叠延伸 成单链 促进骨 骨流失 渗透性 总RNA 测序 抗体 扩增 拼接 克隆 转入 引入 检测 | ||
1.一种骨硬化蛋白单链抗体组合物的制备和LC-MS分析方法，其特征在于包括以下步骤：
0.5ug骨硬化蛋白单链抗体加入5.0g精氨酸，5.0g天门冬氨酸，加入注射用水，溶解，稀释至1000ml，过滤、滤液超滤，分装、冷冻干燥，完毕后压盖；
上述冷冻干燥分为四个阶段：
(1)预冻3小时，温度在-30℃；
(2)减压干燥14小时，温度在-30℃；
(3)升温干燥4小时，温度在-15℃；
(4)二次升温干燥4小时，温度在30℃；
骨硬化蛋白单链抗体，序列为：SEQ-1；
骨硬化蛋白单链抗体的组合物的LC-MS分析
色谱柱：Waters Acquity UPLC BEH C18column(1.7μm，100mm×2.1mm)；
预柱：Acquity UPLC BEH C18 Van Guard pre-column(1.7μm，5mm×2.1mm)；
柱温：35℃；样品槽：5℃；流速：0.5mL/min；进样量：10μL；
流动相：A：乙腈；B：1.0％的乙酸甲醇溶液
梯度条件：
取骨硬化蛋白单链抗体组合物的样品用：流动相A(80％)、流动相B(20％)(体积比)的混合溶液溶解；MS分析选用负离子模式，在以下条件下进行：
离子源温度：150℃；脱溶剂温度：380度；脱溶剂(N2)流速(L/Hr)700；锥孔气(N2)流速(L/Hr)60；毛细管电压(Kv)2.75；锥孔电压(V)60；全扫描质谱范围母离子为m/z 50～10000，子离子为m/z 50～1000；LC-MS数据分析采用仪器随带的Finnigan Xcalibur 1.3软件进行。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军总医院，未经中国人民解放军总医院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201711379304.3/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：艰难梭状芽孢杆菌毒素的人源抗体
- 下一篇：抗VEGF抗体
