[发明专利]一种用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒在制备检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括3条血清miRNA的PCR引物，3条血清miRNA分别为hsa-miR-221-3p、hsa-miR-30b-5p和hsa-miR-142-3p，所述3条血清miRNA的PCR引物包括hsa-miR-221-3p的PCR引物、hsa-miR-30b-5p的PCR引物和hsa-miR-142-3p的PCR引物；

所述3条血清miRNA的PCR引物序列分别如下所示：

hsa-miR-221-3p的引物：5’-GCGCAGCTACATTGTCTGCTGGGTTTC-3’，

hsa-miR-30b-5p的引物：5’-CGCGCGTGTAAACATCCTACACTCAGCT-3’，

hsa-miR-142-3p的引物：5’-CCGCGTGTAGTGTTTCCTACTTTATGGA-3’。

2.根据权利要求1所述的用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒在制备检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂中的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括1条内参miRNA的PCR引物，内参miRNA为hsa-miR-16-5p；所述内参miRNA的PCR引物序列为5’-CGCGCTAGCAGCACGTAAAT-3’。

3.根据权利要求1所述的用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒在制备检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂中的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括RNA提取液、反转录反应液、荧光定量RT-PCR反应液和小RNA吸附柱。

4.根据权利要求3所述的用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒在制备检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂中的应用，其特征在于，所述RNA提取液包括裂解液、去蛋白液、漂洗液、氯仿、无水乙醇和无RNA酶双蒸水；

所述反转录反应液包括反转录酶和反转录缓冲液，所述反转录酶包括E.coliPoly(A)Polymerase、RTase和RNasin；

所述荧光定量RT-PCR反应液包括Master mix、通用下游引物和无RNA酶双蒸水。

5.根据权利要求1所述的用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒在制备检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂中的应用，其特征在于，反转录反应体系以20.0μL计包括：

总RNA：8.0μL；

反转录缓冲液：10.0μL；

反转录酶：2.0μL。

6.根据权利要求1所述的用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒在制备检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂中的应用，其特征在于，荧光定量RT-PCR反应体系以10.0μL计为：

cDNA模板：2.5μL；

Master Mix：5μL；

miRNA上游引物：0.5μL；

通用下游引物：0.5μL；

无RNA酶双蒸水：1.5μL；

其中，所述miRNA上游引物的浓度为10μM，所述miRNA上游引物为hsa-miR-221-3p的PCR引物、hsa-miR-30b-5p的PCR引物、hsa-miR-142-3p的PCR引物或hsa-miR-16-5p的PCR引物。