[发明专利]一种用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒，属于血清生物学标志物领域。所述试剂盒包括3条血清miRNA的PCR引物。本发明提供的用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒，采用3条血清miRA作为诊断标志物，并通过对上述标志物进行定量，鉴别阴虚上火体质，可以代替传统望、闻、问、切的中医诊断方法，将中医证候的诊断与现代分子生物学相结合，达到诊断的标准化；并且该用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒，通过对3条血清miRNA同时定量，鉴别阴虚上火体质，诊断的灵敏度达到95.7%、特异性达到73.6%，并且高于单个miRNA的诊断特性。

技术领域

本发明涉及血清生物学标志物领域，具体涉及一种用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒及其应用。

背景技术

阴虚上火是一种常见的亚健康状态，表现为口干舌燥、目干涩痛、大便干结、心烦易怒，或伴有复发性口舌生疮、牙龈肿痛、咽喉肿胀等炎性症状，俗称上火。阴虚上火虽然尚未达到疾病的临床诊断标准，但作为一种亚健康状态严重影响人们的正常生活与工作，降低生活质量。据报道，阴虚上火体质主要发生在工作、学业压力较大的公司白领和大学生群体中。15至30岁年龄段人群阴虚上火的发生率远远高于其他年龄段，阴虚上火体质的诊断、预防与治疗尤为重要。目前，临床判断阴虚上火的主要方法是通过问诊并且观察舌象、脉象进行，缺乏量化的诊断指标。

系统生物学的特点是整体性、时效性，与中医学整体观念、辩证施治的思想较为一致，系统生物学技术的发展为中医学中复杂生命现象的研究提供了可行条件。miRNA稳定存在于血清和血浆中，适合作为疾病的候选生物学标记物，而且从血清中寻找疾病生物标志物一直以来是人们研究的热点，但是miRNA用于中医证候的生物学标志物还鲜有报道。miRNA测序是系统生物学的一种重要手段，其目的在于发现对基因转录调控有重要作用的全部miRNA，可以通过筛选并鉴定与阴虚上火体质相关的miRNA，应用生物信息学方法构建与基因、miRNA以及蛋白的网络联系，对阴虚上火的本质作出全面解释。

因此，研究一种能够检测与阴虚上火体质相关的miRNA的试剂盒具有重要意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒及其应用，该试剂盒能够代替传统的中医诊断方法，将中医证候的诊断与现代分子生物学相结合，达到诊断的标准化，具有灵敏度高、特异性高的特点。

基于上述目的，本发明提供的一种用于检测阴虚上火体质血清特异性miRNA的试剂盒，所述试剂盒包括3条血清miRNA的PCR引物，3条血清miRNA分别为hsa-miR-221-3p、hsa-miR-30b-5p和hsa-miR-142-3p，所述3条血清miRNA的PCR引物包括hsa-miR-221-3p的PCR引物、hsa-miR-30b-5p的PCR引物和hsa-miR-142-3p的PCR引物；

所述3条血清miRNA的PCR引物序列分别如下所示：

hsa-miR-221-3p的引物：5’-GCGCAGCTACATTGTCTGCTGGGTTTC-3’，

hsa-miR-30b-5p的引物：5’-CGCGCGTGTAAACATCCTACACTCAGCT-3’，

hsa-miR-142-3p的引物：5’-CCGCGTGTAGTGTTTCCTACTTTATGGA-3’。

本发明中，3条血清miRNA的PCR引物即hsa-miR-221-3p的PCR引物、hsa-miR-30b-5p的PCR引物和hsa-miR-142-3p的PCR引物由发明人自己设计，并委托生工生物工程(上海)股份有限公司合成；3条血清miRNA的序列分别如下所示：

hsa-miR-221-3p：AGCUACAUUGUCUGCUGGGUUUC