[发明专利]检测水产品中孔雀石绿的方法

说明书

本发明涉及一种检测水产品中孔雀石绿的方法，该方法不采用常用的液液萃取操作，改为加入适量的无水氯化钙、无水硫酸钠等除水剂进行除水来制作上样液，使目标药物成分更易被乙腈提取，操作简便快速，所用的提取试剂、反应试剂均为普通的化学试剂，不需要使用液相色谱仪、质谱仪等大型检测仪器，分析成本低，适合大范围推广。

技术领域

本发明涉及化学检测技术领域，特别是涉及一种检测水产品中孔雀石绿的方法。

背景技术

孔雀石绿(malachitegreen，MG)，又名碱性绿、盐基块绿、孔雀石绿，化学名为四甲基代二氨基三苯甲烷，分子式为C₂₃H₂₅ClN₂，为暗绿色结晶固体，是一种合成的工业染料。

自1936年以来，许多国家将孔雀石绿广泛用作水产养殖业中，作为杀虫剂和杀菌剂，用来杀灭体外寄生虫和鱼卵中的霉菌。以前在我国被用于欧洲鳗、甲鱼、河蟹、罗非鱼、鳜鱼、鲢鱼等水霉病、小瓜虫病、聚索虫病的防治。从1990年开始，国内外学者陆续研究发现，孔雀石绿及其代谢产物隐色孔雀石绿(leucomalachitegreen，LMG)在鱼体内和环境中残留时间长，其化学官能团-三苯甲烷(triphenylmethane)被确证具有高毒、高残留、“三致”等毒副作用。鉴于此，美国、加拿大、日本、欧盟等许多国家和地区都将其列为水产养殖禁用药物。我国从2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及化合物清单》中。但是，由于孔雀石绿的抗菌效果非常好、价格低廉，加之对其毒副作用的宣传力度不够等原因，在水产养殖中仍有违规使用孔雀石绿的情况。

目前商业化的检测方法主要是采用GB/T19857-2005(水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定)的方法，该法将试样采用乙腈-乙酸铵缓冲溶液提取，乙腈再次提取后，液液分配到二氯甲烷层，经中性氧化铝和阳离子固相柱净化后用液相色谱-串联质谱法测定，并用内标法定量。然而，该法用到了液液萃取法，操作难度较大，回收率不高，对于操作人员要求较高。检测时所用固相萃取柱均需串联使用，必须活化并且上样前需进行一定处理，操作繁琐，不利于快速检测。

发明内容

基于此，有必要一种检测水产品中孔雀石绿的方法，以解决传统方法操作难度大、不利于快速检测的问题。

一种检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取切碎的去除脂肪组织的待测样本，用均质机均质得到均质物；

(2)取所述均质物置于离心管中，每3g所述均质物，对应加入1.5～2.5ml试剂A，振荡混匀，加入3～5ml试剂B，3～5ml试剂C，剧烈振荡后，再加入5～6g试剂D，剧烈振荡后，室温下以3000～5000转/分钟进行离心，取上清液；

(3)移取步骤(2)中所述上清液于反应管中，每1.2ml所述上清液，对应加入7～9ml试剂E，混匀后作为上样液；

(4)将所述上样液通过固相萃取柱，完全过柱并吹干所述固相萃取柱后，向所述固相萃取柱中加入试剂F进行洗脱，收集洗脱液进行检测；

所述试剂A为5wt％～7wt％硼氢化钾溶液；

每10ml～100ml所述试剂B含有0.23g盐酸羟胺、0.24g对甲苯磺酸、5ml乙酸铵；

所述试剂C为乙腈；

所述试剂D包括氧化铝粉末以及无水氯化钙和/或无水硫酸钠，所述氧化铝粉末与所述无水氯化钙和/或无水硫酸钠的质量比值为0.6～1.5；

所述试剂E为2wt％～6wt％乙酸-乙酸铵缓冲液；

所述试剂F包括0.1～0.2mol/L乙酸铵溶液和乙腈的等体积混合物。