[发明专利]检测水产品中孔雀石绿的方法

权利要求书

1.一种检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取切碎的去除脂肪组织的待测样本，用均质机均质得到均质物；

(2)取所述均质物置于离心管中，每3g所述均质物，对应加入1.5～2.5ml试剂A，振荡混匀，加入3～5ml试剂B，3～5ml试剂C，剧烈振荡后，再加入5～6g试剂D，剧烈振荡后，室温下以3000～5000转/分钟进行离心，取上清液；

(3)移取步骤(2)中所述上清液于反应管中，每1.2ml所述上清液，对应加入7～9ml试剂E，混匀后作为上样液；

(4)将所述上样液通过固相萃取柱，完全过柱并吹干所述固相萃取柱后，向所述固相萃取柱中加入试剂F进行洗脱，收集洗脱液进行检测；

所述检测水产品中孔雀石绿的方法还包括以下步骤：

向放置有胶体金颗粒的金标微孔中滴加所述洗脱液以及0.1～0.2mol/L乙酸铵溶液，混匀后，滴加至胶体金免疫层析纸进行检测；

滴加的所述乙酸铵溶液的体积不少于所述洗脱液的体积；

所述试剂A为5wt％～7wt％硼氢化钾溶液；

每10ml～100ml所述试剂B含有0.23g盐酸羟胺、0.24g对甲苯磺酸、5ml乙酸铵；

所述试剂C为乙腈；

所述试剂D包括氧化铝粉末以及无水氯化钙和/或无水硫酸钠，所述氧化铝粉末与所述无水氯化钙和/或无水硫酸钠的质量比值为0.6～1.5，所述试剂D还包括氯化钠，所述氯化钠与所述氧化铝粉末以及无水氯化钙和/或无水硫酸钠的质量比值为0.04～0.12；

所述试剂E为2wt％～6wt％乙酸-乙酸铵缓冲液；

所述试剂F包括0.1～0.2mol/L乙酸铵溶液和乙腈的等体积混合物。

2.如权利要求1所述的检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，所述试剂D为2.6g氧化铝粉末、2.73g无水氯化钙和0.67g氯化钠的混合物。

3.如权利要求1所述的检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，所述试剂E为4wt％乙酸-乙酸铵缓冲液。

4.如权利要求1所述的检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，在步骤(3)中，加入所述试剂E之前，还包括以下步骤：

向所述反应管中加入90～110μl二甘醇，振荡混匀。

5.如权利要求1所述的检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，步骤(4)中所述试剂F加入量为400～500μl。

6.如权利要求1所述的检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，所述试剂F为0.1～0.2mol/L乙酸铵溶液和乙腈等体积混合，再加入氨水调节至pH值为9～11后所得。

7.如权利要求1所述的检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，所述固相萃取柱为以丙磺酸键合硅胶为填料的强阳离子交换型萃取柱。

8.如权利要求1～7任一项所述的检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，所述试剂B为0.23g盐酸羟胺、0.24g对甲苯磺酸、5ml乙酸铵混合后加水至100ml混匀所得。

9.如权利要求8所述的检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，滴加的所述乙酸铵溶液的体积为所述洗脱液的体积的1.5～2倍。

10.如权利要求8所述的检测水产品中孔雀石绿的方法，其特征在于，所述胶体金免疫层析纸上具有硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜包被有相互分离的检测线和质控线，所述检测线含有孔雀石绿抗原，所述质控线含有能与所述孔雀石绿抗原特异结合的抗体；

若检测线显色比质控线深或一样深，则为阴性，表示样本中孔雀石绿的浓度低于检出限；

若检测线显色明显比质控线浅，或检测线呈绿色，则为阳性，表示样本中孔雀石绿的浓度高于检出限；

若质控线未显色，则判断为操作不当或所述胶体金免疫层析纸已失效。