[发明专利]一种具有筛选红酵母作用的甲苯胺蓝O及其应用

说明书

本发明提供了一种具有筛选红酵母作用的甲苯胺蓝O及其应用，在红酵母的培养基中添加甲苯胺蓝O，造成氧胁迫环境，甲苯胺蓝O与紫外诱变共同配合，能够快速高效地筛选出高产类胡萝卜素的红酵母，类胡萝卜素生产领域具有重要意义。

技术领域

本发明属于酵母筛选技术领域，涉及一种具有筛选红酵母作用的甲苯胺蓝O及其应用。

背景技术

类胡萝卜素是一种广泛存在于自然界中的红色、黄色或橘色的脂溶性色素，包括β-类胡萝卜素、虾青素、叶黄素和蕃茄红素等。类胡萝卜素作为前体物质可以生成多种具有重要生理功能的衍生物，如类维生素A、植物激素、色素及芳香类化合物等，具有增强机体免疫力、抗氧化、抗辐射、抗肿瘤和治疗光敏性疾病等重要作用，在食品、化妆品、医药和饲料等行业有着广泛的应用。

类胡萝卜素的工业化生产方法主要包括化学合成法、植物提取法和生物发酵法。化学合成法技术复杂，合成的类胡萝卜素与天然的类胡萝卜素相去甚远，存在一定的副作用；植物提取法成本较高、工艺复杂，在工业化生产应用方面受到较大的限制；利用微生物发酵生产类胡萝卜素，成本低廉、工艺简单、安全高效，目前已成为生产类胡萝卜素的主要方法。

CN 104130952 A公开了一株胶红酵母及其在发酵生产类胡萝卜素和油脂中的应用，该发明对生产菌株进行多轮ARTP(常压室温等离子体)诱变，获得产量较高的诱变菌株，对类胡萝卜素和油脂的工业化生产提供有良好的应用前景和经济效益。然而ARTP诱变条件繁琐，成本较高，诱变后的菌株在自然条件下逐个培养单菌落，效率低下。

因此，提供一种成本较低、操作方便、产率高的红酵母筛选方法，在类胡萝卜素生产领域具有重要意义。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供一种具有筛选红酵母作用的甲苯胺蓝O及其应用，采用甲苯胺蓝O进行红酵母的筛选，不仅提高了筛选效率，而且提高了红酵母的色素产量。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种甲苯胺蓝O作为筛选红酵母试剂的用途。

甲苯胺蓝O(toluidine blue O，TBO)是一种在强光下产生氧负离子的光敏化试剂，主要用于组织染色，本发明中通过在红酵母的培养基中添加TBO，可以造成氧胁迫环境，只有高产类胡萝卜素的红酵母，才能快速生成菌落，显著提高了红酵母的筛选效率。

优选地，所述甲苯胺蓝O的浓度为0.1-5mmol/mL，例如可以是0.1mmol/mL、0.5mmol/mL、1.0mmol/mL、1.5mmol/mL、2.0mmol/mL、2.5mmol/mL、3.0mmol/mL、3.5mmol/mL、4.0mmol/mL、4.5mmol/mL或5.0mmol/mL，优选为0.5-2mmol/mL，进一步优选为1-2mmol/mL。

第二方面，本发明提供了一种筛选试剂，所述筛选试剂包括甲苯胺蓝O。

第三方面，本发明提供了一种筛选红酵母的方法，采用如第二方面所述的筛选试剂，包括以下步骤：

(1)使用添加有甲苯胺蓝O的液体培养基培养红酵母；

(2)将红酵母悬液涂布于固体培养基上，培养得到筛选后的红酵母。

优选地，步骤(1)所述甲苯胺蓝O的浓度为0.1-5mmol/mL，例如可以是0.1mmol/mL、0.5mmol/mL、1.0mmol/mL、1.5mmol/mL、2.0mmol/mL、2.5mmol/mL、3.0mmol/mL、3.5mmol/mL、4.0mmol/mL、4.5mmol/mL或5.0mmol/mL，优选为0.5-2mmol/mL，进一步优选为1-2mmol/mL。

优选地，步骤(1)所述液体培养基为酵母浸出粉胨葡萄糖培养基。