[发明专利]一种具有筛选红酵母作用的甲苯胺蓝O及其应用在审
| 申请号： | 201711376273.6 | 申请日： | 2017-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN108070632A | 公开（公告）日： | 2018-05-25 |
| 发明（设计）人： | 田子罡;陈达;王春雨 | 申请（专利权）人： | 博益德（北京）生物科技有限公司;天津博菲德科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/04 | 分类号： | C12Q1/04;C12N1/14;C12P23/00;C12R1/645 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 100000 北京市海淀区中*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甲苯胺蓝O 红酵母 类胡萝卜素 筛选 重要意义 紫外诱变 培养基 氧胁迫 应用 高产 配合 | ||
1.一种甲苯胺蓝O作为筛选红酵母试剂的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述甲苯胺蓝O的浓度为0.1-5mmol/mL，优选为0.5-2mmol/mL，进一步优选为1-2mmol/mL。
3.一种筛选试剂，其特征在于，所述筛选试剂包括甲苯胺蓝O。
4.一种筛选红酵母的方法，其特征在于，采用如权利要求3所述的筛选试剂，包括以下步骤：
(1)使用添加有甲苯胺蓝O的液体培养基培养红酵母；
(2)将红酵母悬液涂布于固体培养基上，培养得到筛选后的红酵母。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述甲苯胺蓝O的浓度为0.1-5mmol/mL，优选为0.5-2mmol/mL，进一步优选为1-2mmol/mL；
优选地，步骤(1)所述液体培养基为酵母浸出粉胨葡萄糖培养基；
优选地，步骤(1)所述培养的温度为25-30℃；
优选地，步骤(1)所述培养的时间为22-25h；
优选地，步骤(1)所述培养时摇床的转速为180-220rpm。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述培养的温度为25-30℃；
优选地，步骤(2)所述培养的时间为2-5天。
7.根据权利要求4-6任一项所述的方法，其特征在于，在步骤(1)之前还包括初筛和诱变的步骤；
优选地，所述初筛和诱变具体包括：
(1’)将活化的红酵母接种于液体培养基中进行培养，作为备诱变菌株；
(2’)将步骤(1’)所述的备诱变菌株进行紫外灯照射，得到诱变红酵母；
优选地，步骤(2’)所述紫外灯的功率为30-50W；
优选地，步骤(2’)所述紫外灯照射的时间为1-10min。
8.根据权利要求4-7任一项所述的方法，其特征在于，采用如权利要求3所述的筛选试剂，包括以下步骤：
(1)将活化的红酵母接种于酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基中进行培养，作为备诱变菌株；
(2)将步骤(1)所述的备诱变菌株在功率为30-50W的紫外灯下照射1-10min，得到诱变红酵母；
(3)使用添加有0.1-5mmol/mL甲苯胺蓝O的酵母浸出粉胨葡萄糖液体培养基，在25-30℃下培养步骤(2)所述的诱变红酵母22-25h，摇床的转速为180-220rpm；
(4)将红酵母悬液涂布于固体培养基上，在25-30℃下培养2-5天，得到筛选后的红酵母。
9.一种如权利要求4-8任一项所述的方法筛选得到的红酵母。
10.一种如权利要求9所述的红酵母用于发酵生产；
优选地，所述红酵母用于发酵生产类胡萝卜素。
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