[发明专利]一种鉴定草甘膦抗性水稻的方法

说明书

本发明公开了一种鉴定草甘膦抗性水稻的方法。本发明提供了一种引物组合，由引物对甲和引物对乙组成；引物对甲由En‑F和En‑R组成；引物对乙由Ec‑F和Ec‑R组成；En‑F如序列3所示；En‑R如序列4所示；Ec‑F如序列5所示；Ec‑R如序列6所示。本发明还保护筛选转基因水稻En‑12和转基因水稻Ec‑8为亲本的后代中的草甘膦抗性植株的方法：以转基因水稻En‑12和转基因水稻Ec‑8为亲本的后代植株的基因组DNA为模板，分别采用引物对甲和引物对乙进行PCR扩增，如采用引物对甲可得到521bp产物且采用引物对乙可得到550bp产物，该后代植株为草甘膦抗性植株。本发明提供的引物组合可用于鉴定草甘膦抗性水稻，准确度高、特异性强、灵敏度高。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种鉴定草甘膦抗性水稻的方法。

背景技术

水稻是世界上最重要的粮食作物之一，在我国粮食生产中占有举足轻重的地位。但是水稻的产量却受到农田面积减少、农村劳动力匮乏、水资源短缺等问题的困扰，为了解决这些问题，水稻的生产方式正在由水田插秧模式向旱地直播稻进行转变。然而旱地直播稻的产量和质量都直接受到稻田杂草的威胁，传统的除草方式主要依靠人工拔出或锄草，耗时费力、效率低并且投入成本高，化学除草方式的推广使用不仅降低了生产成本还大大提高了水稻的生产效率。

草甘膦是一种广谱灭生性、内吸传导型优秀除草剂，具有高效、广谱、低毒、低残留、不破坏土壤环境、对大多数植物具有灭生性等其它除草剂所不可比拟的优点，广泛用于果园、胶园、非耕地、免耕地中玉米、大豆、棉花播前或播后处理。草甘膦是植物体内5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸(5-enolpyruvylshiki-mate-3-phosate，EPSP)的一种类似物，它的毒性机理主要是竞争性抑制莽草酸途径中催化磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)和3-磷酸莽草酸(S3P)合成EPSP，从而抑制EPSP合酶的活性导致分枝酸合成受阻，阻断芳香族氨基酸和一些芳香化合物的生物合成，从而扰乱了生物体正常的氮代谢而使其死亡。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定草甘膦抗性水稻的方法。

本发明首先提供了一种引物组合，由引物对甲和引物对乙组成；所述引物对甲由引物En-F和引物En-R组成；所述引物对乙由引物Ec-F和引物Ec-R组成；

所述引物En-F为如下(a1)或(a2)：

(a1)序列表的序列3所示的单链DNA分子；

(a2)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；

所述引物En-R为如下(a3)或(a4)：

(a3)序列表的序列4所示的单链DNA分子；

(a4)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；

所述引物Ec-F为如下(b1)或(b2)：

(b1)序列表的序列5所示的单链DNA分子；

(b2)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；

所述引物Ec-R为如下(b3)或(b4)：

(b3)序列表的序列6所示的单链DNA分子；

(b4)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子。

所述引物组合的功能为如下(d1)或(d2)：

(d1)鉴定转基因水稻En-12和转基因水稻Ec-8为亲本的后代中的草甘膦抗性植株；