[发明专利]一种基于纤突蛋白F的检测血清8型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于F蛋白的检测血清8型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被有血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F的表达蛋白的ELISA酶标板，阳性、阴性对照，HRP标记的兔抗鸡二抗，稀释液、显色液、洗涤液、终止液。本发明的ELISA试剂盒能特异性的检测出FAdV‑8抗体，而与抗流感病毒血清、抗马立克病毒血清、抗新城疫病毒血清、抗鸡传染性贫血病病毒血清、网状内皮细胞增生病病毒、抗血清4型禽腺病毒血清、抗减蛋综合征病毒血清以及SPF鸡血清不反应。因此，该试剂盒具有良好FAdV‑8的特异性，能用于FAdV‑8感染及免疫状况流行病学调查。

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种基于纤突蛋白F的检测血清8禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒。

背景技术

禽腺病毒(FowlAdenovirus，FAdV)属于腺病毒科禽腺病毒属，分为5个种(A-E)，12个血清型。虽然在世界各地均有报道，FAdV感染一般引起亚临床状况，而急性感染主要引起包涵体肝炎、心包积液以及肌胃糜烂等。自2013年，国内鸡群由FAdV引起的包涵体肝炎、心包积液病例逐渐增多。到2015年，FAdV感染在国内多个省份鸡群爆发。目前国内FAdV爆发不仅发生在3-4周龄肉鸡，还发生于10-20周龄的蛋鸡，给养鸡业造成了严重经济损失。病毒分离鉴定发现，目前血清8型禽腺病毒(FAdV-8)在鸡群较为流行。然目前尚无针对FAdV-8血清学抗体检测的快速方法及其试剂盒。

发明内容

本发明的目的是在于提供一种基于F蛋白的检测血清8型禽腺病毒抗体的间接ELISA 试剂盒。

本发明的原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了血清8型禽腺病毒F基因的原核表达质粒，之后将该质粒转化入BL21细胞进行原核表达并纯化并进一步将纯化的蛋白作为包被抗原建立试剂盒，检测血清8型禽腺病毒特异性抗体。

实现本发明目的的技术方案是：

本发明所述的一种基于F蛋白的检测血清8型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，包括包被有纤突蛋白基因F表达产物的ELISA酶标板，阳性对照、阴性对照，HRP标记的兔抗鸡二抗，样品(血清)稀释液、底物显色液、洗涤液、终止液。

进一步地，所述包被有纤突蛋白基因F表达产物的的ELISA酶标板，是通过将纯化的 F基因原核表达产物包被于96孔ELISA酶标板而制备。

本发明的另一实施方案提供一种血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F的表达蛋白，所述表达蛋白的制备方法包括如下步骤：

(1)利用重组酶ExnaseTM II将pGEX-6p-1线性化载体与血清8型禽腺病毒F基因的PCR产物进行重组克隆，重组克隆经序列验证后，命名为pGEX-6p-1-F，挑取阳性克隆进行质粒制备，并进行PCR鉴定；

(2)将步骤(1)中PCR鉴定的阳性克隆转化到BL21细胞中，并将菌液以1：100体积比接种于加AMP的LB培养基中，250rpm摇3h后，加入IPTG于16℃下进行诱导表达过夜，收集细菌，用PBS重悬后，超声破碎，离心分上清和沉淀；

(3)将步骤(2)中得到的上清经GST亲和层析柱纯化后得到所述血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F的表达蛋白。

本发明的另一实施方案提供上述的血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F的表达蛋白在制备检测血清8型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒中的应用。

本发明的另一实施方案提供一种用于检测血清8型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，所述试剂盒包括包被有权利要求1所述表达蛋白的ELISA酶标板。所述试剂盒还任选包括阳性对照、阴性对照，HRP标记的兔抗鸡二抗，稀释液、显色液、洗涤液、终止液中的一种或几种。

所述阳性对照为抗血清8型禽腺病毒的鸡血清，阴性对照为SPF鸡血清。