[发明专利]一种基于纤突蛋白F的检测血清8型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测血清8型禽腺病毒抗体的间接ELISA试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括包被有血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F的表达蛋白的ELISA酶标板；

所述血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F的表达蛋白的制备方法包括如下步骤：

（1）利用重组酶ExnaseTM II将pGEX-6p-1线性化载体与血清8型禽腺病毒F基因的PCR产物进行重组克隆，重组克隆经序列验证后，命名为pGEX-6p-1-F，挑取阳性克隆进行质粒制备，并进行PCR鉴定；

（2）将步骤（1）中PCR鉴定的阳性克隆转化到BL21细胞中，并将菌液以1：100体积比接种于加AMP的LB培养基中，250rpm摇3h后，加入IPTG于16℃下进行诱导表达过夜，收集细菌，用PBS重悬后，超声破碎，离心分上清和沉淀；

（3）将步骤（2）中得到的上清经GST亲和层析柱纯化后得到所述血清8型禽腺病毒纤突蛋白基因F的表达蛋白；

所述FAdV-8病毒F蛋白基因片段的特异性扩增引物为：

上游引物：5’-GTTCCAGGGGCCCATGGCGACCTCGACTCC-3’

下游引物：5’-GTTTTCACCGTCATTAAGGAGCGTTGGCGG-3’。

2.权利要求1所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还任选包括阳性对照、阴性对照，HRP标记的兔抗鸡二抗，稀释液、显色液、洗涤液、终止液中的一种或几种。

3.权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为抗血清8型禽腺病毒的鸡血清，阴性对照为SPF鸡血清。

4.权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述稀释液或洗涤液均为含0.05% Tween-20的PBST。

5.权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述显色液是指TMB显色液。

6.权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述终止液为2M硫酸。

7.权利要求2-6任一项所述的试剂盒在制备检测血清8型禽腺病毒抗体试剂中的应用。

8.权利要求7所述的应用，其特征在于，所述试剂盒检测血清8型禽腺病毒抗体的步骤及阳性判定标准如下：将阳性血清1：400稀释后，加入A1、A2孔，将阴性血清1：400稀释后加入A3、A4孔，剩下的孔用于检测待检样品，1:400稀释，37℃反应1h；PBST洗涤3遍后，加入工作浓度的HRP标记的兔抗鸡二抗，37℃反应1h；PBST洗涤3遍后，进行显色10min，之后加入终止液终止显色，读取OD450吸光值，OD450大于0.2的孔判为阳性。