[发明专利]拆分型单碱基基因编辑系统及其应用

权利要求书

1.一种核酸构建物组合，其特征在于，包括第一核酸构建物和第二核酸构建物，其中，所述第一核酸构建物具有从5’-3’的式I结构：

P1-X1-X2-X3-Z-X4 (I)；

其中，P1为第一启动子序列；

X1为胞嘧啶脱氨酶Apobec1的编码序列；

X2为任选的连接序列；

X3为Cas9核酸酶的N端片段的编码序列或KKH核酸酶的N端片段的编码序列；

Z为第一融合肽N端片段的编码序列；

X4为polyA序列；

所述第二核酸构建物具有从5’-3’的式II结构：

P2-Z-Y1-Y2-Y3 (II)；

其中，P2为第二启动子序列；

Z为第一融合肽C端片段的编码序列；

Y1为Cas9核酸酶的C端片段的编码序列或KKH核酸酶的C端片段的编码序列；

Y2为尿嘧啶糖苷酶抑制剂UGI的编码序列；

Y3为polyA序列；

并且，各“-”独立地为键或核苷酸连接序列；

所述的第一启动子和第二启动子各自独立地选自下组：CAG启动子、CMV启动子、或其组合；

所述连接序列选自下组：XTEN、GGS、（GGS）₃、（GGS）₇、或其组合；

所述Cas9核酸酶的N端片段为登录号为2828055的Cas9n核酸酶的2-573位氨基酸；

所述Cas9核酸酶的C端片段为登录号为2828055Cas9n核酸酶的574-1368位氨基酸；

所述KKH的N端片段为登录号为2828033的KKH核酸酶的2-739位氨基酸；

所述KKH的C端片段为登录号为2828033的KKH核酸酶的740-1053位氨基酸；

所述的第一融合肽为内含肽Intein；并且所述第一融合肽N端片段为内含肽Intein的2-103位氨基酸；所述第一融合肽C端片段为内含肽Intein的104-137位氨基酸；

所述polyA序列各自独立地选自下组：BGH的polyA、SV40的polyA、或其组合；

并且当所述第一核酸构建物中的X3为Cas9核酸酶的N端片段的编码序列时，则所述第二核酸构建物中的Y1为Cas9核酸酶的C端片段的编码序列；当所述第一核酸构建物中的X3为KKH核酸酶的N端片段的编码序列时，则所述第二核酸构建物中的Y1为KKH核酸酶的C端片段的编码序列。

2.如权利要求1所述的核酸构建物组合，其特征在于，所述的第一启动子和第二启动子各自独立地为CAG启动子。

3.如权利要求1所述的核酸构建物组合，其特征在于，所述连接序列为XTEN。

4.如权利要求1所述的核酸构建物组合，其特征的在于，所述X3元件的来源选自下组：酿脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、或其组合。

5.如权利要求1所述的核酸构建物组合，其特征在于，所述第一核酸构建物的长度≤4.7kb。

6.如权利要求5所述的核酸构建物组合，其特征在于，所述第一核酸构建物的长度≤4.5kb。

7.如权利要求6所述的核酸构建物组合，其特征在于，所述第一核酸构建物的长度为3.0-4.5kb。

8.如权利要求1所述的核酸构建物组合，其特征在于，所述第二核酸构建物的长度≤4.7kb。

9.如权利要求8所述的核酸构建物的组合，其特征在于，所述第二核酸构建物的长度≤4.5kb。

10.如权利要求9所述的核酸构建物的组合，其特征在于，所述第二核酸构建物的长度为3.0-4.5kb。