[发明专利]一种与(1,3)-β-D-葡聚糖特异性结合的核酸适配体及其应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种与(1,3)‑β‑D‑葡聚糖特异性结合的核酸适配体，本发明提供的与(1,3)‑β‑D‑葡聚糖特异性结合的核酸适配体DNA序列如SEQ ID NO.1所示。本发明基于富集的配体系统进化技术，经过多轮的富集筛选，筛选出与(1,3)‑β‑D‑葡聚糖特异性结合的核酸适配体。基于该核酸适配体设计传感器,利用流式细胞术建立了检测(1,3)‑β‑D‑葡聚糖的检测方法。本发明的核酸适配体及检测方法可用于快速检测(1,3)‑β‑D‑葡聚糖并应用于制备侵袭性真菌感染辅助诊断的检测试剂中,为侵袭性真菌感染诊断提供了新的思路,具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种与(1,3)-β-D-葡聚糖特异性结合的核酸适配体及其应用。

背景技术

侵袭性真菌感染(Invasive fungal infection,IFI)是指真菌侵入人体组织、血液或器官，并在其中生长繁殖引起组织损害、器官功能障碍、炎症反应的病理改变及病理生理过程。近年来，由于免疫抑制剂、广谱抗生素、糖皮质激素、抗肿瘤药物等的广泛使用及外科手术导管、置管的应用，侵袭性真菌感染的发病率和死亡率逐渐增多。由于IFI的临床症状和体征缺乏特异性，确诊主要依赖组织病理学，在临床上往往较难获得，而真菌培养对取材要求高、时间长、阳性率低，导致侵袭性真菌感染的早期诊断非常困难。因此，临床上急需建立一种敏感、特异且操作便捷的用于诊断真菌感染检测方法。

(1,3)-β-D-葡聚糖是除接合菌外所有真菌细胞壁的结构成分，在酵母样真菌中含量最高，约占细胞壁干重的50％-60％，而原核生物、病毒和人类细胞均不含此多糖。真菌侵入人体时，宿主细胞会对真菌进行氧化处理，真菌破壁后持续释放出可溶性(1,3)-β-D-葡聚糖进入血液。目前应用广泛的检测真菌壁成分—(1,3)-β-D-葡聚糖的方法是G试验，其机制是(1,3)-β-D-葡聚糖可特异性激活鲎变性细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固。但是G试验具有一定的局限性，其酶促反应容易受到很多因素的影响，易受到内毒素、药物等干扰，假阳性率高。

核酸适配体是指利用富集的配体系统进化技术(Systematic evolution ofligands by exponential enrichment,SELEX)，从随机单链核酸库中筛选出来的能与相应的靶分子高亲合性、高特异性结合的寡核苷酸片段。适配体可以是一段脱氧核苷酸或核苷酸序列，具有丰富多样的三维结构，可模拟几乎所有可能存在的与靶分子相互作用的空间结构，如发卡、假节、四聚体、I-基序、茎环等，其结合的靶分子可以是蛋白质、糖类、细胞因子、小分子毒素、病毒、细菌、金属离子等，因此核酸适配体被广泛应用于生物传感器等领域。同时适配体为核苷酸序列，容易制备和修饰，结构活性稳定，并且其分子量小，与靶分子的立体结构域进行结合，可进行分子改造，为生物化学及生物医学发展提供了一种快速识别的研究平台，并展示出良好的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于(1,3)-β-D-葡聚糖检测的核酸适配体及其应用。

要实现对(1,3)-β-D-葡聚糖快速定性和定量检测，需要获取到能与(1,3)-β-D-葡聚糖特异性结合且亲和力高的物质。

为实现上述目的，本发明提供一种与(1,3)-β-D-葡聚糖特异性结合的核酸适配体，所述核酸适配体的DNA序列如SEQ ID NO.1。进一步地，由于适配体的可修饰性，可以通过不同的修饰达到不同的目的，还可对本发明提供的与(1,3)-β-D-葡聚糖特异性结合的核酸适配体DNA序列进行修饰、延长或截短，例如修饰材料可以为荧光物质、生物素、纳米物质及相关酶类物质等。

进一步地，本发明所述的与(1,3)-β-D-葡聚糖特异性结合的核酸适配体的序列为SEQ ID NO.1所示的DNA序列经替换、缺失和/或插入一个或几个核苷酸后形成与SEQ IDNO.1具有同等功能的序列。