[发明专利]一种纽莫康定B0的提纯与精制方法

说明书

本发明公开了一种纽莫康定B0的提纯与精制方法，包括:a)将含有纽莫康定B0的发酵液pH值调至2.0~3.0，压滤，菌渣用低分子醇浸提，得浸提液；b)调整浸提液的醇浓度及pH；c)用大孔吸附树脂吸附浸提液后，依次用水、丙酮‑水溶液梯度洗脱树脂，然后用丙酮‑酸溶液洗脱树脂，收集富含纽莫康定B0的洗脱液；d)纽莫康定B0洗脱液加水稀释后，用PSA‑RPC粒径为30um苯基聚合物纳米微球吸附，用水冲洗纳米微球后用低分子醇洗脱，收集富含纽莫康定B0的洗脱液；e)以常规方法结晶得纽莫康定B0。通过提纯精制方法的改进，使得纽莫康定B0的提取精制的生产成本低，纽莫康定B0纯度高，工艺步骤简单，易于工业化生产。

技术领域

本发明属药物化学领域，具体涉及一种纽莫康定B0的提纯与精制方法。

背景技术

纽莫康定 B0（Pneumocandin B0）是由真菌产生的次级代谢产物，是合成抗真菌药物卡泊芬净（Caspofungin）的中间体。纽莫康定 B0 由真菌发酵产生，发酵过程中会产生与纽莫康定 B0 结构相近似的副产物及大量的色素，因此纽莫康定 B0 的提纯精制方法较复杂。

在Pneumocandins From Zalerion Arboricola I. Discovery And Isolation（The Journal Of Antibiotics 45(12):1853-66）一文中描述了纽莫康定 B0 的提取纯化方法 ：采用甲醇对发酵液提取，离心后的菌渣加入甲醇再提取 2 次，得到的甲醇提取液合并 ；甲醇提取液加水稀释后用 SP207 树脂吸附，先用 65% 甲醇洗，再用 100% 甲醇洗脱，收集纽莫康定 B0 ；加水稀释后用 HP20 树脂吸附，先用 50% 甲醇洗，再用 100% 甲醇洗脱，收集纽莫康定B0 ；加水稀释后再次用 SP207 树脂吸附，先用 65% 甲醇洗，再用 100%甲醇洗脱，收集纽莫康定 B0 ；浓缩，用醋酸异丙酯沉淀，离心过滤得到纽莫康定 B0 固体，纯度为 67% ；最后用硅胶层析和 HP20 树脂吸附进行再次纯化，浓缩，用乙腈沉淀，最终纽莫康B0 产品纯度约 85%。

美国专利申请Purification Process（US6610822）提供的纽莫康定 B0 的提取纯化方法，采用萃取和反萃取法，这一方法要使用大量的异丁醇、甲醇和庚烷等有机溶媒，反复萃取和洗涤，操作较复杂，最终沉淀得到的纽莫康定 B0 固体，含量 80% 左右。

以上两种纽莫康定 B0 的提取纯化方法都存在操作步骤复杂，发酵液色素和杂质难去除，最终产品色泽深和纯度不高等问题。 中国发明专利《制备纽莫康定 B0 的方法》（专利申请号 200910133118.0）描述了一种新的纽莫康定 B0 纯化方法，主要步骤是 ：a）离心纽莫康定 B0 发酵液，取菌丝体，用甲醇浸提纽莫康定 B0 ；b）将甲醇浸提液蒸干，再用正丁醇浸提纽莫康定 B0 ；c）将正丁醇浸提液蒸干，再用 70-80% 甲醇浸提纽莫康定B0，过酸性氧化铝柱，收集流出液 ；d）将纽莫康定 B0 收集液蒸干后，用 60-70% 甲醇溶解，上 HP20 吸附树脂，用 85-95% 甲醇洗脱，收集洗脱液纽莫康定 B0 纯度在 50-65% 间；e）将纽莫康定 B0 收集液蒸干，溶于 60-70% 甲醇中，上反相树脂YPR- Ⅱ，用 85-95% 甲醇洗脱，收集的纽莫康定 B0 纯度大于 90% ；f）将纽莫康定 B0 收集液蒸干后，用甲醇溶解，滴加少量水使之过饱和结晶析出，制得纽莫康定 B0，纯度可达到 96%。这个纯化方法虽然能够改善纽莫康定 B0 产品质量，脱除了大量色素和提高了产品纯度，但整个工艺步骤复杂，几乎每一步骤都要将纽莫康定 B0 溶液蒸干，在实验室规模的小试中容易做到，但在工业化生产中是很难将纽莫康定 B0 溶液蒸干，而且纽莫康定 B0 在长时间加热下容易破坏，因此，该方法并不适合纽莫康定 B0 的工业化生产。 因此寻找更简便的提纯精制方法，才有可能实现纽莫康定 B0的工业化生产。

发明内容