[发明专利]羊梨形虫检测与鉴别的方法与试剂盒在审
| 申请号： | 201711357850.7 | 申请日： | 2017-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN108384871A | 公开（公告）日： | 2018-08-10 |
| 发明（设计）人： | 关贵全;王锦明;刘军龙;杨吉飞;刘爱红;李有全;罗建勋;殷宏 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院兰州兽医研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6893 | 分类号： | C12Q1/6893;C12Q1/686 |
| 代理公司： | 兰州振华专利代理有限责任公司 62102 | 代理人： | 张晋 |
| 地址： | 730046 *** | 国省代码： | 甘肃;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 梨形虫 病原 检测 待测样本 扩增产物 熔解曲线 重组质粒 试剂盒 鉴别 熔解曲线分析 血液基因组 饱和染料 待测样品 高分辨率 疾病诊断 检测结果 鉴别检测 快速检测 可检测 感染 重合 引物 体内 | ||
1.羊梨形虫非疾病诊断的检测与鉴别方法，其特征在于：构建羊巴贝斯虫未定种、莫氏巴贝斯虫HB亚种、莫氏巴贝斯虫LT亚种、吕氏泰勒虫和尤氏泰勒虫18sRNA重组质粒，提取待检测羊的血液基因组DNA得到待测样本，在反应体系内加入饱和染料再用引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2对重组质粒和待测样本进行PCR扩增，再进行高分辨率熔解曲线分析，根据有无扩增产物确定待测样品有无感染羊梨形虫，根据扩增产物熔解曲线与重组质粒的熔解曲线重合情况确定所感染的羊梨形虫的种类。
2.根据权利要求1所述的羊梨形虫非疾病诊断的检测与鉴别方法，其特征在于所用的饱和染料为Forget-Me-NotTMqPCRMasterMix。
3.根据权利要求1所述的羊梨形虫非疾病诊断的检测与鉴别方法，其特征在于PCR扩增时的反应体系为：
PCR扩增时的反应条件为：95℃预变性2min；95℃变性5s；60℃退火/延伸30s；40个循环；
HRM分析的条件为：95℃60s；40℃60s；60-95℃收集数据，温度上升速率为0.2℃/s。
4.羊梨形虫检测与鉴别的试剂盒，其特征在于试剂盒内包括：两条引物SEQ ID No.1和SEQ ID No.2和饱和染料。
5.根据权利要求4所述的羊梨形虫检测与鉴别的试剂盒，其特征在于试剂盒内有Forget-Me-NotTMqPCRMasterMix和标准羊巴贝斯虫未定种18sRNA重组质粒SEQ ID No.3、标准莫氏巴贝斯虫NB亚种18sRNA重组质粒序列SEQ ID No.4、标准莫氏巴贝斯虫LZ亚种18sRNA重组质粒SEQ ID No.5、标准吕氏泰勒虫18sRNA重组质粒SEQ ID No.6和标准尤氏泰勒虫18sRNA重组质粒SEQ ID No.7。
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