[发明专利]Luc-GFP标记的高转移性人肝癌细胞株及其在原位肝癌模型中的应用有效
| 申请号： | 201711353167.6 | 申请日： | 2017-12-15 |
| 公开（公告）号： | CN108285891B | 公开（公告）日： | 2021-08-13 |
| 发明（设计）人： | 马艳;张晶晶;金小宝;李小波;汪洁;许敏华 | 申请（专利权）人： | 广东药科大学 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12Q1/02;A01K67/027 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 林丽明 |
| 地址： | 510006 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | luc gfp 标记 转移性 肝癌 细胞株 及其 原位 模型 中的 应用 | ||
1.Luc-GFP标记的高转移性肝癌细胞株，其特征在于，是以肝癌细胞株HCCLM3为母细胞，通过慢病毒转染包装有pCDH-CMV-Luc-EF1-GFP-Puro的病毒液，再经嘌呤霉素筛选，获得稳定表达GFP并具有荧光素酶活性的高转移性人肝癌细胞株HCCLM3。
2.根据权利要求1所述的Luc-GFP标记的高转移性肝癌细胞株，其特征在于，所述pCDHCMV-Luc-EF1-GFP-Puro是以psiCHECK-2载体为模版，扩增Luc基因，再将Luc基因重组连接到pCDH-CMV-MCS-EF1-GFP-T2A-Puro载体上构建而得。
3.根据权利要求2所述的Luc-GFP标记的高转移性肝癌细胞株，其特征在于，Luc基因的PCR扩增引物包括上下游引物，其序列依次如SEQ ID NO：1～2所示。
4.根据权利要求1所述的Luc-GFP标记的高转移性肝癌细胞株，其特征在于，在慢病毒转染过程中加入终浓度为4～8μg/mL聚凝胺。
5.根据权利要求1所述的Luc-GFP标记的高转移性肝癌细胞株，其特征在于，所述病毒液的MOL为8～12。
6.根据权利要求1所述的Luc-GFP标记的高转移性肝癌细胞株，其特征在于，是先将肝癌细胞株培养于含10% FBS的MEM培养基中，再取状态良好的对数生长期肝癌细胞按5×104cell/孔接种于24孔板中，过夜培养后进行慢病毒转染。
7.权利要求1～6任一项所述的Luc-GFP标记的高转移性肝癌细胞株在构建原位肝癌模型中的应用。
8.权利要求1～6任一项所述的Luc-GFP标记的高转移性肝癌细胞株在筛选或评估治疗肝癌药物中的应用。
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