[发明专利]一种具有高的SOD酶活性的Salen型锰配合物-壳聚糖复合材料及其制备方法

说明书

本发明公开了一种具有高的SOD酶活性的Salen型锰配合物‑壳聚糖复合材料及其制备方法，所述的Salen型配合物是2，6‑二甲酰基苯酚与乙二胺缩合的产物与锰离子形成的配合物，该配合物通过Salen型配合物中的醛基与壳聚糖上的氨基以C＝N键结合而成。本发明将具有高的SOD活性的Salen型锰配合物与壳聚糖以共价键结合，使活性位点均匀分散于壳聚糖载体上，SOD活性检测及重现性实验均表明该复合材料具有稳定性高，活性好，生物相容性好的特点，有望在涉及清除超氧阴离子自由基的相关应用领域得到应用。

技术领域

本发明涉及一种超氧化物歧化酶(SOD)的模拟物，具体涉及一种以壳聚糖为载体的Salen型锰配合物为活性位点的SOD模拟物的制备。

背景技术

超氧化物歧化酶是生物体系中一种重要的抗氧化酶，可将生物体内的超氧阴离子自由基转化为过氧化氢和水，具有SOD功能的抗氧化剂在医学上可用于多种疾病的治疗。由于天然SOD酶存在提取、储存困难、分子量大不易透过细胞膜等问题限制其使用，一般用具有SOD活性的模拟物代替天然SOD酶进行相关治疗。为了克服小分子模拟物固有的缺陷，如重复利用率差，难以回收利用，可与生物体内大分子作用使其产生毒性等问题，模拟物的研究已从小分子转向与大分子环境与活性中心相结合的系统模拟：如以纳米颗粒、聚合物和天然材料为载体的SOD的模拟研究。但纳米颗粒存在分散性差，不均匀易团聚；合成的聚合物在降解速率、降解后产物的毒性及排放存在诸多问题，而生物相容性好、可生物降解且降解产物无毒的天然材料如羧甲基纤维素、壳聚糖引起人们的关注。因其可注射性，好的渗透性，含水量高及和组织相似的机械性能而成为首选材料。Salen型锰配合物是以被证明的具有高的SOD活性的小分子配合物，本发明借助壳聚糖上的氨基与Salen型锰配合物分子中的醛基反应合成了Salen型锰配合物修饰的壳聚糖复合材料，经SOD活性测试表明该材料除具有高的SOD活性外，还兼具可循环利用、稳定性好且生物相容性特点。

发明内容

基于以上现有技术的不足，本发明所解决的技术问题是将具有高活性SOD酶活性的小分子与壳聚糖凝胶通过共价键结合，形成具有SOD活性位点且性能稳定的有机无机杂化材料，该设计在壳聚糖凝胶上增加了分子中的催化活性中心，达到提高其生物相容及酶活性的双重目的。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种具有高的SOD酶活性的Salen型锰配合物-壳聚糖复合材料的制备方法，包含如下步骤：

步骤一、壳聚糖凝胶制备：将95％脱乙酰度壳聚糖溶于乙酸溶液中，稳定后与三聚磷酸钠溶液混合，剧烈搅拌，形成象牙白悬浊液，静置，离心分离，并用超纯水洗涤，产物即为所述的壳聚糖凝胶；

步骤二、Salen型锰配合物修饰壳聚糖复合材料的制备：将Salen-Mn配合物搅拌溶于无水DMF中得到混合液A，另取湿润的壳聚糖凝胶，超声分散于无水DMF中得到混合液B，将混合液B倾倒入混合液A中，室温搅拌反应，离心分离凝胶沉淀，将所得絮状凝胶沉淀用水与乙醇洗涤4-6次，每次洗涤间隔至少1.5小时以上，并且将凝胶沉淀浸泡于乙醇中；洗涤完成后，离心分离，40-50℃真空干燥24小时以上，所得黄绿色固体仔细研磨，即为所述的具有高的SOD酶活性的Salen型锰配合物-壳聚糖复合材料。其合成路线图、光电子能谱、红外图谱及扫描电镜图分别见图1-4。

作为上述技术方案的优选，本发明提供的具有高的SOD酶活性的Salen型锰配合物-壳聚糖复合材料的制备方法进一步包括下列技术特征的部分或全部：