[发明专利]一种检测细胞分裂素6-BA的化学发光免疫传感器的制备方法及其分析方法在审

专利信息
申请号: 201711335100.X 申请日: 2017-12-14
公开(公告)号: CN108061797A 公开(公告)日: 2018-05-22
发明(设计)人: 罗淑芬;李鹏霞;胡花丽;周宏胜;张雷刚 申请(专利权)人: 江苏省农业科学院
主分类号: G01N33/531 分类号: G01N33/531;G01N33/552;G01N33/577;G01N21/76
代理公司: 南京苏创专利代理事务所(普通合伙) 32273 代理人: 张学彪
地址: 211225 江苏省南京市溧水*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 检测 细胞分裂 ba 化学 发光 免疫 传感器 制备 方法 及其 分析
【说明书】:

发明公开了一种检测细胞分裂素6‑BA的化学发光免疫传感器的制备方法及其分析方法,包括以下步骤:以金纳米粒子为固定载体,以共价结合的方式,将细胞分裂素6‑BA相应的包被抗原固定于相应结合位点,从而制得该免疫传感器;在此基础上,采用竞争免疫分析法,联合流动注射,应用于化学发光分析,构建了一个高灵敏的自动化化学发光免疫分析细胞分裂素6‑BA的方法。本发明具有快速,准确,样品用量少,稳定性好,特异性高,灵敏度高等特点,可适用于植物组织内源6‑苄基腺嘌呤(6‑BA),玉米素,二氢玉米素,激动素等细胞分裂素的测定。

技术领域

本发明属于化学发光免疫分析领域,特别涉及一种检测细胞分裂素6-BA的化学发光免疫传感器的制备方法及其分析方法。

背景技术

化学发光免疫分析是将化学发光系统与免疫反应相结合,用化学发光相关的物质标记抗体或抗原,与待测的抗原或抗体反应后,经过分离游离态的化学发光标记物,加入化学发光底物产生化学发光,进行抗原或抗体的定量或定性检测。近年来,化学发光免疫分析方法由于其具有灵敏度高、特异性强、适用面广、所需设备简单、线性范围较宽等优点,日益受到人们的青睐,在生命科学、临床医学以及环境、食品等领域得到广泛应用。而在实际应用中,常常需检测低丰度分析物样品,发展高灵敏的化学发光免疫分析方法,是近年来免疫分析方法发展的主要方向;随着纳米技术的发展,纳米材料,如金纳米粒子、碳纳米管、碳纳米角、SiO2纳米粒子及它们的复合纳米结构,已用于超灵敏免疫传感器的构建。

细胞分裂素是一类重要的植物生长调节剂,它有许多种类,如玉米素、玉米素核糖苷,二氢玉米素、0-配糖物及其核苷,异戊烯基腺嘌呤,激动素,6-BA等。关于细胞分裂素的功能,最早发现可促进细胞分裂,后来许多研究表明,细胞分裂素也在植物发育过程中起重要作用,如控制顶端优势,根的形成,叶绿体发育,花和叶片的衰老及采后衰老等。因此,了解植物体内细胞分裂素的含量具有重要的应用价值。

目前细胞分裂素含量的检测方法主要有气相色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法和电化学法等,也有文献报道了免疫分析法,但多为酶联免疫分析法,且其分析灵敏度及线性范围受到一定的限制。因此,开发一种基于纳米材料的高灵敏度自动化化学发光免疫分析方法具有广阔的应用前景。

发明内容

技术问题:为了解决现有技术的缺陷,本发明提供了一种检测细胞分裂素6-BA的化学发光免疫传感器的制备方法及其分析方法。

技术方案:本发明提供了一种检测细胞分裂素6-BA的化学发光免疫传感器的制备方法,包括以下步骤:

(1)金纳米粒子的制备

将100mL浓度为0.01%的HAuCl4溶液煮沸,然后在搅拌的过程中,向其中加入2.5mL浓度为1%的柠檬酸三钠,继续加热10min后停止加热,待其冷却到室温后将制得的金纳米粒子分散于浓度为1%的壳聚糖醋酸缓冲液中,置于4℃下保存待用;

(2)完全抗原制备

取2ml纯甲醇,依次向该甲醇内加入以下试剂:

2mg细胞分裂素6-BA核苷;

滴加1mL 0.01mol/L NaIO4,室温搅拌20min;

180μL 0.1mol/L乙二醇,室温搅拌10min;

滴加2mL蛋白溶液,所述蛋白溶液中含有10mg牛血清蛋白或10mg卵清蛋白;

滴加浓度为5%的K2CO3调反应液pH至9.3,室温搅拌反应液1h;

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